小鼠Il-2和Il-7增強DNA疫苗免疫原性的協(xié)同效應(yīng)及其分子機制的研究.pdf

1、細胞因子作為生物佐劑以增強疫苗，特別是DNA疫苗的免疫原性一直倍受關(guān)注。我們通過小鼠實驗證明，犬白介素-2(IL-2)和犬IL-7基因?qū)θ毿〔《綱P2 DNA疫苗的免疫原性具有明顯的增強作用，并發(fā)現(xiàn)二者具有協(xié)同增強效應(yīng)。為探討協(xié)同效應(yīng)的分子機制，本實驗利用模式抗原卵清蛋白（OVA）的基因作為DNA疫苗，通過小鼠模型動物分析了小鼠IL-2（mIL-2）和mIL-7對OVA DNA疫苗免疫的協(xié)同增強作用，并探討了其協(xié)同效應(yīng)的分子機制。

2、r>　　通過RT-PCR分別擴增小鼠IL-2、IL-7和雞OVA基因，分別構(gòu)建它們各自的真核表達載體和IL-2/IL-7雙基因表達載體。將各種表達載體轉(zhuǎn)染HEK293T細胞，經(jīng)Westernblot檢測培養(yǎng)基中的重組蛋白，以確定構(gòu)建的表達載體能否介導(dǎo)相應(yīng)重組蛋白進行分泌表達。然后用不同組合的表達載體（即空載體、mIL-2、mIL-7、mIL-2/mIL-7、OVA、OVA+mIL-2、OVA+mIL-7和OVA+mIL-2/mIL-7）

3、免疫小鼠。在免疫后不同時間通過ELISA方法檢測小鼠血清OVA的抗體水平及IFN-γ和IL-4的表達水平。采用淋巴細胞增殖實驗(MTT)檢測免疫小鼠脾淋巴細胞增殖指數(shù)，同時采用流式細胞術(shù)(Flowcytometry)檢測免疫小鼠CD4+/CD8+T淋巴細胞比值，mIL-2受體和mIL-7受體的表達水平，以及表達mIL-2受體和mIL-7受體的淋巴細胞數(shù)量。
　　結(jié)果顯示，擴增的3種基因的序列與GenBank中的序列一致，構(gòu)建的4種

4、表達載體結(jié)構(gòu)正確，并能介導(dǎo)其相應(yīng)的基因在真核細胞中進行分泌表達。免疫結(jié)果顯示，三組共免疫組小鼠血清OVA抗體(IgG1和IgG2a)水平、脾臟淋巴細胞增殖指數(shù)、IFN-γ和IL-4表達水平均顯著高于OVA單免疫組，且OVA+mIL-2/mIL-7共免疫組又顯著高于其它兩組共免疫組，表明mIL-2和mIL-7對DNA疫苗的體液免疫和細胞免疫應(yīng)答具有明顯的協(xié)同增強作用。同時還證明mIL-2可明顯提高CD4+/CD8+比值，而mIL-7明顯降

5、低CD4+/CD8+比值，表明mIL-2更利于刺激CD4+T細胞的增殖，而mIL-7則更利于刺激CD8+T細胞的增殖。為探討協(xié)同增強作用的分子機制，分別檢測了兩種細胞因子對各自受體表達的影響，結(jié)果顯示mIL-7可明顯誘導(dǎo)淋巴細胞mIL-2受體的表達，而mIL-2可明顯刺激表達mIL-7受體淋巴細胞的增殖，這可能是IL-2和IL-7對增強DNA疫苗免疫原性的協(xié)同效應(yīng)的重要分子機制。
　　本研究不僅進一步證實了IL-2和IL-7對DN