小鼠Il-2和Il-7增強(qiáng)DNA疫苗免疫原性的協(xié)同效應(yīng)及其分子機(jī)制的研究.pdf

1、細(xì)胞因子作為生物佐劑以增強(qiáng)疫苗，特別是DNA疫苗的免疫原性一直倍受關(guān)注。我們通過(guò)小鼠實(shí)驗(yàn)證明，犬白介素-2(IL-2)和犬IL-7基因?qū)θ?xì)小病毒VP2 DNA疫苗的免疫原性具有明顯的增強(qiáng)作用，并發(fā)現(xiàn)二者具有協(xié)同增強(qiáng)效應(yīng)。為探討協(xié)同效應(yīng)的分子機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)利用模式抗原卵清蛋白（OVA）的基因作為DNA疫苗，通過(guò)小鼠模型動(dòng)物分析了小鼠IL-2（mIL-2）和mIL-7對(duì)OVA DNA疫苗免疫的協(xié)同增強(qiáng)作用，并探討了其協(xié)同效應(yīng)的分子機(jī)制。

2、r>　　通過(guò)RT-PCR分別擴(kuò)增小鼠IL-2、IL-7和雞OVA基因，分別構(gòu)建它們各自的真核表達(dá)載體和IL-2/IL-7雙基因表達(dá)載體。將各種表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，經(jīng)Westernblot檢測(cè)培養(yǎng)基中的重組蛋白，以確定構(gòu)建的表達(dá)載體能否介導(dǎo)相應(yīng)重組蛋白進(jìn)行分泌表達(dá)。然后用不同組合的表達(dá)載體（即空載體、mIL-2、mIL-7、mIL-2/mIL-7、OVA、OVA+mIL-2、OVA+mIL-7和OVA+mIL-2/mIL-7）

3、免疫小鼠。在免疫后不同時(shí)間通過(guò)ELISA方法檢測(cè)小鼠血清OVA的抗體水平及IFN-γ和IL-4的表達(dá)水平。采用淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(MTT)檢測(cè)免疫小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)，同時(shí)采用流式細(xì)胞術(shù)(Flowcytometry)檢測(cè)免疫小鼠CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值，mIL-2受體和mIL-7受體的表達(dá)水平，以及表達(dá)mIL-2受體和mIL-7受體的淋巴細(xì)胞數(shù)量。
　　結(jié)果顯示，擴(kuò)增的3種基因的序列與GenBank中的序列一致，構(gòu)建的4種

4、表達(dá)載體結(jié)構(gòu)正確，并能介導(dǎo)其相應(yīng)的基因在真核細(xì)胞中進(jìn)行分泌表達(dá)。免疫結(jié)果顯示，三組共免疫組小鼠血清OVA抗體(IgG1和IgG2a)水平、脾臟淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)、IFN-γ和IL-4表達(dá)水平均顯著高于OVA單免疫組，且OVA+mIL-2/mIL-7共免疫組又顯著高于其它兩組共免疫組，表明mIL-2和mIL-7對(duì)DNA疫苗的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答具有明顯的協(xié)同增強(qiáng)作用。同時(shí)還證明mIL-2可明顯提高CD4+/CD8+比值，而mIL-7明顯降

5、低CD4+/CD8+比值，表明mIL-2更利于刺激CD4+T細(xì)胞的增殖，而mIL-7則更利于刺激CD8+T細(xì)胞的增殖。為探討協(xié)同增強(qiáng)作用的分子機(jī)制，分別檢測(cè)了兩種細(xì)胞因子對(duì)各自受體表達(dá)的影響，結(jié)果顯示mIL-7可明顯誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞mIL-2受體的表達(dá)，而mIL-2可明顯刺激表達(dá)mIL-7受體淋巴細(xì)胞的增殖，這可能是IL-2和IL-7對(duì)增強(qiáng)DNA疫苗免疫原性的協(xié)同效應(yīng)的重要分子機(jī)制。
　　本研究不僅進(jìn)一步證實(shí)了IL-2和IL-7對(duì)DN