雞球蟲3-1E抗原和NA4抗原對4種艾美耳球蟲交叉免疫保護作用的研究.pdf

1、雞球蟲病(Coccidiosis)是由艾美耳球蟲(Eimeria)引起的一種嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的寄生原蟲病，傳統(tǒng)的防制辦法還存在一些問題。核酸疫苗是一種新的生物技術(shù)疫苗，具有可靠的安全性、高穩(wěn)定性、能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生全面的免疫應(yīng)答等優(yōu)點。近年來，雞球蟲核酸疫苗的研究取得了重要進展。 本實驗室已從E acervulina和E.necatrix孢子化卵囊分別克隆得到免疫保護性抗原基因3-1E和NA4，并利用DNA重組技術(shù)成功構(gòu)建了免疫調(diào)

2、節(jié)型DNA疫苗pVAX1.0-NA4-IL-2和pVAX1.0-3-1E-IL-2，實驗表明這兩種DNA疫苗對本種球蟲感染均具有較好的免疫保護作用。 用DNAStar中的MegAlign軟件對3-1E和NA4抗原的基因進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3-1E抗原在E.tenella和E.acervulina之間基因序列的同源性達99.8％，氨基酸序列的同源性為99.4％；NA4抗原與E.tenella的TA4抗原之間基因序列的同源性達91.4

3、％，氨基酸序列的同源性為86％。用Protean軟件對3-1E和NA4抗原的二級結(jié)構(gòu)和抗原性進行預(yù)測分析，結(jié)果表明這兩個抗原均具有很好的抗原性。 將免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗pVAX1.0-3-1E-IL-2經(jīng)腿部肌肉分別于14、21日齡兩次免疫雛雞，28日齡經(jīng)口接種新鮮的E. tenella、E.necatrix、E.acervulina和E.maxima孢子化卵囊，34日齡宰殺全部實驗動物，分別作腸道病變計分、腸道卵囊計數(shù)、增重和

4、存活率幾個指標測定，以抗球蟲指數(shù)(ACI)綜合判定其保護性。結(jié)果表明，免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗pVAX1.0-3-1E-IL-2抗E.tenella、E.necatrix、E.acervulina和E。maxima的ACI值分別為180.11、174.24、180.64和164.74。 用同樣的方法對免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗pVAX1.0-NA4-IL-2進行交叉免疫保護性實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，pVAX1.0-NA4-IL-2抗E.tenel