即刻早期基因Cyr61及神經(jīng)調(diào)節(jié)因子NRG-1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及相關(guān)性.pdf

1、目的： 子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道最常見(jiàn)的三大惡性腫瘤之一，近年隨著全球婦女人均壽命的延長(zhǎng)等因素，其發(fā)生率已呈上升趨勢(shì)。如何更加深入地研究子宮內(nèi)膜癌發(fā)病過(guò)程及機(jī)制、探索新的治療子宮內(nèi)膜癌的方法，成為當(dāng)前子宮內(nèi)膜癌研究的主要方向。本研究通過(guò)RT．PCR的方法檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌冰凍標(biāo)本中NRG-1和Cyr61基因的表達(dá)情況，來(lái)分析探討二者在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的意義，同時(shí)推測(cè)他們與子宮內(nèi)膜癌臨床病理的聯(lián)系。 材料與方法: 一

2、、臨床材料 選取中國(guó)醫(yī)科大學(xué)1998年6月～2006年7月婦產(chǎn)科收治的子宮內(nèi)膜樣腺癌36例(內(nèi)膜癌組)，子宮內(nèi)膜非典型增生12例(非典型增生組)，選取同期宮腔鏡手術(shù)獲得的正常增殖期子宮內(nèi)膜組織10例(對(duì)照組)，36例子宮內(nèi)膜癌按1988年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行手術(shù)病理分期。所有患者術(shù)前均未接受放射治療、化學(xué)藥物治療或激素治療，且不合并其它腫瘤。 二、主要試劑 RNA提取試劑盒(美國(guó)Trizol I

3、nvetrogen公司)；RT-PCR反應(yīng)試劑盒(大連寶生生物公司)。 三、實(shí)驗(yàn)方法 RT-PCR：冰凍組織標(biāo)本，Trizol總RNA提取液提取總RNA，紫外分光光度測(cè)定OD260/280，估計(jì)RNA純度。反轉(zhuǎn)錄mRNA，擴(kuò)增cDNA。瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，紫外燈下觀察結(jié)果并拍照。Cyr61、NRG-1均以PBS代替逆轉(zhuǎn)錄酶作為陰性對(duì)照。 四、結(jié)果判定 用ID Kodak成像分析系統(tǒng)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物條帶進(jìn)行

4、掃描分析。Cyr61及NRG-1基因的表達(dá)量通過(guò)同時(shí)擴(kuò)增β-actin的表達(dá)進(jìn)行校正，以分別的光密度比值作為基因在正常子宮內(nèi)膜、非典型增生內(nèi)膜及相應(yīng)的子宮內(nèi)膜癌組織表達(dá)量。 五、統(tǒng)計(jì) 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用X±s表示，采用NSPSS11.5軟件進(jìn)行單因素方差分析、獨(dú)立樣本的T檢驗(yàn)及相關(guān)分析。 結(jié)果: 一、Cyr61的表達(dá)RT-PCR結(jié)果顯示正常子宮內(nèi)膜中Cyr61基因的表達(dá)水平高于非典型增生內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織，前者

5、光密度比值為0.9136±0.02803，后兩者分別為0.6997±0.02159，0.3950±0.9656，三者比較有顯著性差異(F=199.440，P<0.001)。Cyr61基因mRNA表達(dá)量與手術(shù)病理分期及病理分級(jí)有關(guān)(P<0.01)，與肌層浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)(F=0.115，P=0.909)。 二、NRG-1的表達(dá)RT-PCR結(jié)果顯示正常子宮內(nèi)膜中NRG-1基因的表達(dá)水平高于非典型增生內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織，前者光密度比值為

6、0.8264±0.04284，后兩者分別為0.6564±0.02817，0.3290±0.12438，三者比較有顯著性差異(F=116.158，P<0.001)。NRG-1基因表達(dá)量與手術(shù)病理分期及病理分級(jí)有關(guān)(P<0.001)，與肌層浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)(F=1.698，P=0.099)。 三、Cyr61與NRG-1的關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NRG-1與Cyr61基因的表達(dá)存在顯著正相關(guān)性(r=0.910．P<0.01)。 結(jié)論:

7、 1、Cyr61基因在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)減弱，且臨床期別晚、組織學(xué)分級(jí)差Cyr61表達(dá)水平低，提示Cyr61可能作為子宮內(nèi)膜癌的生長(zhǎng)負(fù)調(diào)節(jié)因子，在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展、惡化中起一定作用。 2、NRG-1基因mRNA在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)減弱，且表達(dá)量隨其病理分級(jí)的升高、手術(shù)病理分期的進(jìn)展而降低，推測(cè)NRG-1同樣是子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)負(fù)調(diào)節(jié)因子，其表達(dá)的減弱或缺失是子宮內(nèi)膜癌發(fā)展及惡化的有利條件。 3、子宮內(nèi)膜癌中NR