Cx43基因在黑龍江鯉魚肌肉發(fā)育中表達(dá)及調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、作為世界上養(yǎng)殖最廣泛的淡水魚類之一，鯉魚具有適應(yīng)性強(qiáng)，生長速度快，易養(yǎng)殖，飼料轉(zhuǎn)化效率高等特點(diǎn)，其肉質(zhì)鮮美并具有很高的營養(yǎng)價(jià)值，因而對(duì)優(yōu)良品質(zhì)鯉魚選育的需求日益增加。
　　連接蛋白Cx43是縫隙鏈接蛋白Cx基因家族的成員，也是表達(dá)最廣泛的連接蛋白。在胚胎發(fā)育的早期，連接蛋白Cx43能在肌纖維中廣泛表達(dá)，并通過低電阻的偶聯(lián)促進(jìn)胚胎肌纖維收縮。此外，在信號(hào)分子和代謝產(chǎn)物的傳遞的過程中Cx43也是不可或缺的。在哺乳動(dòng)物、斑馬魚、青蛙和雞

2、的胚胎晚期以及出生后早期階段Cx43的表達(dá)會(huì)有所下調(diào)，Cx43保守的表達(dá)模式暗示在此過程中存在著某種作用機(jī)制。另有研究表明Cx43是miR-1和miR-206共同的靶基因，并且Cx43在骨骼肌的融合過程中起到了至關(guān)重要的作用。
　　在研究通過整體原位雜交方法檢測(cè)Cx43基因在不同時(shí)期鯉魚胚胎中的表達(dá)情況，以成肌分化因子MyoD為陽性對(duì)照。結(jié)果表明:受精后12h，Cx43基因在胚胎的眼周、頭部以及心臟部位明顯表達(dá)，同時(shí)在神經(jīng)管和近軸

3、細(xì)胞有表達(dá)且一直延伸至胚胎的尾牙;當(dāng)鯉魚胚胎發(fā)育至24h時(shí)，Cx43基因主要集中在神經(jīng)管以及背部近軸細(xì)胞中表達(dá)，并在鯉魚胚胎的體節(jié)中表達(dá)明顯，在受精后24h的胚胎中，Cx43基因在所有體節(jié)中均有表達(dá)，且表達(dá)最強(qiáng);而受精后48h，除頭部外，在體軸和近軸細(xì)胞等處表達(dá)量明顯下降，體節(jié)幾乎觀察不到Cx43的表達(dá)。RT-PCR結(jié)果也顯示Cx43基因在24h的鯉魚胚胎中表達(dá)量最高。表明Cx43基因主要在鯉魚胚胎早期發(fā)育過程中開始表達(dá)并發(fā)揮作用，隨著

4、鯉魚胚胎的孵化Cx43表達(dá)量下降。
　　利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)在斑馬魚Cx43基因中存在與miRNA-1和miRNA-206結(jié)合的靶位點(diǎn)，通過與鯉魚功能基因組比對(duì)，結(jié)果表明:鯉魚Cx43基因的3'UTR區(qū)能夠和斑馬魚Cx43基因絕大部分匹配，且在miRNA-1和miRNA-206結(jié)合的種子序列處前7位堿基能夠完全匹配。為了進(jìn)一步檢測(cè)預(yù)測(cè)結(jié)果，通過構(gòu)建雙熒光素酶報(bào)告載體PMIR-Cx43，在小鼠成纖維細(xì)胞3T3中檢測(cè)miRNA-1和