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文檔簡介
1、研究背景:經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動脈介入術(shù)(percutaneous transluminal coronaryintervention,PCI)是目前冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的主要治療措施之一,且已發(fā)展成為一種較成熟的介入性治療手段,然而血管成形術(shù)后再狹窄(restenosis,RS)的高發(fā)生率嚴重影響了手術(shù)遠期效果,至今還沒有很滿意的治療方法。探討RS的機制及其新型治療方法成為心血管藥理領(lǐng)域的一大熱點與難點。研究表明,縫隙連接(gap jun
2、ction,GJ)參與了血管平滑肌細胞(vascular smooth musclecells.VSMCs)間的信息傳遞及其增殖和遷移過程,而VSMCs的增殖和遷移是血管壁重構(gòu)發(fā)生再狹窄的重要因為之一。我們假設(shè)縫隙連接蛋白重構(gòu)可能參與了血管重構(gòu)和再狹窄的病理過程。
目的:本實驗旨在觀察慢病毒介導(dǎo)的大鼠Cx43基因沉默后對體外培養(yǎng)VSMCs的Cx43 mRNA和蛋白的表達以及對10%FBS誘導(dǎo)的VSMCs增殖和遷移的影響,為
3、開發(fā)新型載基因支架治療RS的臨床前研究奠定理論基礎(chǔ)。
方法:觀察不同感染復(fù)數(shù)(MOI分別為0、50、100、150、200)的Cx43-RNAi-LV對10%FBS誘導(dǎo)的VSMCs增殖的影響,MTT比色法測定吸光度值(OD492),繪制細胞生長曲線;細胞劃痕法測定細胞遷移距離并計算細胞遷移抑制率;RT-PCR法測定Cx43 mRNA的表達;Western Blotting法檢測Cx43蛋白的表達。
結(jié)果:MT
4、T法結(jié)果顯示:與MOI0組比較,Cx43-RNAi-LV(MOI100)組48h時OD值顯著性降低(p<0.05)。時間點為48h、72h、96h時,隨著MOI的增大,OD值的降低有極顯著性差異(p<0.01)。后續(xù)實驗以MOI為100轉(zhuǎn)染VSMCs48h。而NC-GFP-LV感染組細胞OD值無顯著差異,表明Cx43-RNAi-LV對10%FBS誘導(dǎo)的VSMCs增殖具有明顯的抑制作用。
細胞劃痕法顯示:與正常對照組比較,C
5、x43-RNAi-LV感染組細胞遷移抑制率為37.37%(P<0.01),而NC-GFP-LV感染組細胞遷移距離無顯著差異,結(jié)果表明Cx43-RNAi-LV對10%FBS誘導(dǎo)的VSMCs遷移具有抑制作用。
RT-PCR和Western Blotting檢測結(jié)果均顯示:Cx43-RNAi-LV感染組Cx43mRNA及其蛋白表達量較NC-GFP-LV感染組和正常對照組明顯降低(P<0.01)。
結(jié)論:①大鼠Cx4
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