Cx43及AKAP95參與細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當(dāng)方式明確標(biāo)明，并符合法律規(guī)范和《廈門大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活動(dòng)規(guī)范(試行)》。另外，該學(xué)位論文為()課題(組)的研究成果，獲得()課題一(組)經(jīng)費(fèi)或?qū)嶒?yàn)室的資助，在()實(shí)驗(yàn)室完成。(請?jiān)谝陨侠ㄌ?hào)內(nèi)填寫課題或課題組負(fù)責(zé)人或?qū)嶒?yàn)室名稱，未有此項(xiàng)聲明內(nèi)容的，可以不作特別聲明。)聲明人(簽名)：年月日摘

2、要摘要肺癌是嚴(yán)重危害人類健康的常見惡性腫瘤之一，近年來，肺癌致死率依然呈急劇上升的狀態(tài)，當(dāng)前也沒有有效的治療方法。Cx43是構(gòu)成細(xì)胞間隙連接通道重要的膜蛋白，主要功能是允許不同細(xì)胞間的信息交流，研究表明Cx43的生物學(xué)作用并不局限于在細(xì)胞膜上形成間隙連接，它還存在于細(xì)胞內(nèi)參與細(xì)胞周期的調(diào)控，且這一過程不依賴于細(xì)胞間隙連接通訊功能。AKAP95蛋白能錨定PKA于細(xì)胞核內(nèi)，PKA與AKAP95蛋白連接形成復(fù)合物并接近其特異性底物，繼而發(fā)揮其

3、激酶活性。此外AKAP95蛋白也參與了細(xì)胞生理活動(dòng)中許多過程，如參與細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡過程。PKA激酶在cAMP介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)通路扮演重要角色，其活性依賴于cAMP，且被認(rèn)為與細(xì)胞增殖有密切聯(lián)系，在腫瘤細(xì)胞中PKA活性降低。本文選取人肺腺癌細(xì)胞A549作為研究對(duì)象，CoIP結(jié)合westernblot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)去磷酸化作用促進(jìn)了Cx43與AKAP95的結(jié)合。通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒改變A549中Cx43及AKAP95的表達(dá)，westernblot實(shí)

4、驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Cx43及AKAP95影響細(xì)胞周期調(diào)控因子CyclinDl、CyclinEl、CDK2、CDK4的表達(dá)，Cx43改變了CyclinDl(pThr286)及CDKl一(pThrl4)的磷酸化。IF結(jié)果顯示上調(diào)Cx43蛋白表達(dá)對(duì)CyclinEl在A549細(xì)胞中的定位產(chǎn)生影響。利用藥物Fosklin及H89處理A549細(xì)胞，改變PKA激酶活性，westernblot結(jié)果提示PKA活性影響Cx43、AKAP95、CyclinDl蛋白表達(dá)水