雞ANXA2基因在卵泡發(fā)育中的表達及調(diào)控研究.pdf

1、Annexin A2（ANXA2）是一種鈣依賴性膜磷脂結(jié)合蛋白，存在于生物體的多種細胞類型中。脊椎動物細胞的Annexins被命名為Annexin A家族。其中Annexin A2由339個氨基酸組成,分子量為36 kD,主要表達于內(nèi)皮細胞、單核細胞及某些腫瘤細胞中，主要參與細胞膜的形成、細胞膜的轉(zhuǎn)運、胞吞胞吐作用、細胞增殖活動、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、分化及凋亡過程以及血管生成等重要的細胞生命活動。ANXA2基因在多種腫瘤中經(jīng)常上調(diào)表達，如卵巢

2、癌。根據(jù)先前的研究結(jié)果，我們也發(fā)現(xiàn)ANXA2基因在高產(chǎn)蛋率雞卵巢中表達上調(diào)，該結(jié)果表明ANXA2基因與禽類卵泡發(fā)育成熟相關(guān)。
　　本研究利用熒光定量PCR技術(shù)，我們研究了ANXA2 mRNA在雞卵巢成熟和卵泡發(fā)育過程中的表達變化，結(jié)果顯示，在未開產(chǎn)雞卵巢（6周齡）中ANXA2 mRNA的表達較低，隨著年齡的增長，在開產(chǎn)雞卵巢（23周齡）中ANXA2 mRNA的表達極顯著升高（P<0.01）。本實驗還收集了產(chǎn)蛋高峰期蛋雞的各級卵泡，

3、包括POF1（the first post-ovulatory follicle）、F1（the first largefollicle）、F3（the third large follicle）和小白卵泡（SWF，the small white follicle），熒光定量PCR檢測到不同卵泡中ANXA2 mRNA的表達情況如下：從等級前卵泡到排卵前卵泡，隨著卵泡的發(fā)育，ANXA2 mRNA的表達逐漸增加（P<0.01）；多次重復(fù)實驗

4、顯示F1卵泡的ANXA2 mRNA表達水平最高，表明ANXA2基因很可能與參與排卵過程；POF1卵泡的ANXA2 mRNA表達水平顯著下降（P<0.01），并且和SWF卵泡中的ANXA2 mRNA表達水平相當(dāng)。我們分離了F1~F4卵泡的膜細胞和顆粒細胞，熒光定量PCR結(jié)果表明ANXA2mRNA在膜細胞中的表達極顯著高于顆粒細胞（P<0.01）。在卵泡膜細胞中，F(xiàn)SH和雌激素可促進ANXA2基因的表達，而LH和孕酮對ANXA2基因的表達無

5、顯著作用。另外，本研究進一步證明了FSH誘導(dǎo)ANXA2基因表達的調(diào)控區(qū)為核心啟動子區(qū)。本實驗還采用真核基因過表達技術(shù)研究了ANXA2基因的表達調(diào)控機制，將構(gòu)建好的真核過表達載體轉(zhuǎn)染到分離培養(yǎng)的雞卵泡膜細胞中，結(jié)果表明，過表達膜細胞ANXA2基因可促進血管生成因子及其受體的轉(zhuǎn)錄表達。而且，過表達ANXA2增加了血管內(nèi)皮生長因子A（VEGFA）的分泌量，促進了膜細胞的增殖。
　　我們目前的研究不僅為 ANXA2基因在雞卵巢中的表達調(diào)控