苦參堿對(duì)表皮葡萄球菌生物被膜形成的影響研究.pdf

1、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis，Se)長(zhǎng)期以來(lái)被認(rèn)為是條件致病菌，且致病性弱。但隨著對(duì)表皮葡萄球菌研究的深入，發(fā)現(xiàn)其通?？勺鳛槟退幓虻馁A藏場(chǎng)所，能夠形成生物被膜及其它毒力因子，極易導(dǎo)致奶牛乳房炎的發(fā)生并使得該病反復(fù)發(fā)作難以治愈。因此，研究藥物對(duì)表皮葡萄球菌生物被膜形成的影響和機(jī)制，為臨床上治療由表皮葡萄球菌引起的奶牛乳房炎提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
　　從采集臨床乳房炎陽(yáng)性奶牛奶樣中分離鑒定表皮

2、葡萄球菌，鑒定后采用剛果紅和結(jié)晶紫染色法篩選獲得生物被膜陽(yáng)性菌株。利用PCR擴(kuò)增表皮葡萄球菌生物被膜相關(guān)基因（icaA、icaR、icaAB、aap、bap、atlE、sigB、agr、fbe和sarA）;應(yīng)用平板法建立表皮葡萄球菌生物被膜的體外模型，觀察分析生物被膜的形成過(guò)程;測(cè)定苦參堿、苦豆子總堿、環(huán)丙沙星及紅霉素對(duì)產(chǎn)膜菌株的MIC和SMIC;采用XTT法、銀染法、激光共聚焦顯微鏡結(jié)合圖像分析軟件對(duì)藥物作用下生物被膜形成過(guò)程及結(jié)構(gòu)參

3、數(shù)進(jìn)行分析;最后通過(guò)qPCR測(cè)定分離株在苦參堿、苦豆子總堿、環(huán)丙沙星及紅霉素作用下表皮葡萄球菌生物被膜形成相關(guān)基因(sigB、agr和fbe)相對(duì)表達(dá)量的變化情況。
　　結(jié)果表明，從368份乳房炎奶樣中分離獲得15株表皮葡萄球菌，產(chǎn)生物被膜陽(yáng)性菌株高達(dá)46.7％。分離得到的表皮葡萄球菌對(duì)青霉素耐藥性最高，且被膜陽(yáng)性菌株對(duì)臨床常用抗生素的耐藥性明顯高于陰性菌株。其中sigB、agr、fbe和atlE基因普遍存在于產(chǎn)膜菌株中，形態(tài)學(xué)觀

4、察發(fā)現(xiàn)24h時(shí)生物被膜初步形成，至48h時(shí)生物被膜明顯增厚，結(jié)構(gòu)變得更為復(fù)雜?？鄥A和苦豆子總堿對(duì)浮游表皮葡萄球菌的MIC高于環(huán)丙沙星和紅霉素，但對(duì)生物被膜的SMIC50效果優(yōu)于環(huán)丙沙星和紅霉素。苦參堿等藥物對(duì)早期表皮葡萄球菌生物被膜均具有抑制作用，然而隨著生物被膜的加厚苦參堿和苦豆子總堿對(duì)被膜的抑制作用優(yōu)于紅霉素和環(huán)丙沙星?？鄥A對(duì)表皮葡萄球菌生物被膜毒力基因sigB、agr和fbe均有調(diào)控作用，且隨著藥物濃度的遞增，對(duì)agr基因表達(dá)