苦參堿對表皮葡萄球菌生物被膜形成的影響研究.pdf

1、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis，Se)長期以來被認為是條件致病菌，且致病性弱。但隨著對表皮葡萄球菌研究的深入，發(fā)現(xiàn)其通常可作為耐藥基因的貯藏場所，能夠形成生物被膜及其它毒力因子，極易導致奶牛乳房炎的發(fā)生并使得該病反復發(fā)作難以治愈。因此，研究藥物對表皮葡萄球菌生物被膜形成的影響和機制，為臨床上治療由表皮葡萄球菌引起的奶牛乳房炎提供理論依據(jù)和技術支持。
　　從采集臨床乳房炎陽性奶牛奶樣中分離鑒定表皮

2、葡萄球菌，鑒定后采用剛果紅和結晶紫染色法篩選獲得生物被膜陽性菌株。利用PCR擴增表皮葡萄球菌生物被膜相關基因（icaA、icaR、icaAB、aap、bap、atlE、sigB、agr、fbe和sarA）;應用平板法建立表皮葡萄球菌生物被膜的體外模型，觀察分析生物被膜的形成過程;測定苦參堿、苦豆子總堿、環(huán)丙沙星及紅霉素對產(chǎn)膜菌株的MIC和SMIC;采用XTT法、銀染法、激光共聚焦顯微鏡結合圖像分析軟件對藥物作用下生物被膜形成過程及結構參

3、數(shù)進行分析;最后通過qPCR測定分離株在苦參堿、苦豆子總堿、環(huán)丙沙星及紅霉素作用下表皮葡萄球菌生物被膜形成相關基因(sigB、agr和fbe)相對表達量的變化情況。
　　結果表明，從368份乳房炎奶樣中分離獲得15株表皮葡萄球菌，產(chǎn)生物被膜陽性菌株高達46.7％。分離得到的表皮葡萄球菌對青霉素耐藥性最高，且被膜陽性菌株對臨床常用抗生素的耐藥性明顯高于陰性菌株。其中sigB、agr、fbe和atlE基因普遍存在于產(chǎn)膜菌株中，形態(tài)學觀

4、察發(fā)現(xiàn)24h時生物被膜初步形成，至48h時生物被膜明顯增厚，結構變得更為復雜?？鄥A和苦豆子總堿對浮游表皮葡萄球菌的MIC高于環(huán)丙沙星和紅霉素，但對生物被膜的SMIC50效果優(yōu)于環(huán)丙沙星和紅霉素?？鄥A等藥物對早期表皮葡萄球菌生物被膜均具有抑制作用，然而隨著生物被膜的加厚苦參堿和苦豆子總堿對被膜的抑制作用優(yōu)于紅霉素和環(huán)丙沙星?？鄥A對表皮葡萄球菌生物被膜毒力基因sigB、agr和fbe均有調控作用，且隨著藥物濃度的遞增，對agr基因表達