巴馬香豬CIK細胞培養(yǎng)體系建立及體外殺傷活性研究.pdf

1、采集巴馬香豬頸靜脈血液，采用Percoll密度梯度離心法分離其外周血淋巴細胞，通過對比試驗，建立了豬細胞因子誘導(dǎo)殺傷細胞(cytokine-induced killer)培養(yǎng)體系，采用流式細胞術(shù)和實時定量PCR技術(shù)鑒定了豬CIK細胞表型，利用得到的豬CIK細胞開展了細胞毒活性實驗，最終建立了一種快速獲得大量具有腫瘤細胞殺傷活性的豬淋巴細胞群的方法，利用該方法可以為抗腫瘤免疫及其機制研究提供足夠量的效應(yīng)細胞，也可以為病原微生物引起的體外細

2、胞免疫和免疫逃逸研究提供研究思路。通過本研究的實施，獲得如下結(jié)果:
　　(1)通過對細胞因子和培養(yǎng)基進行優(yōu)化試驗，建立了適用于豬CIK細胞的培養(yǎng)體系，利用該培養(yǎng)體系培養(yǎng)豬外周血淋巴細胞5d后，可以使體系中淋巴細胞的總數(shù)增長近8倍，利用該培養(yǎng)體系可以為體外細胞免疫試驗提供大量的具有NK細胞表型的免疫細胞。
　　(2)利用流式細胞術(shù)分析豬CIK細胞在培養(yǎng)過程中的比例變化結(jié)果表明，培養(yǎng)5d后，淋巴細胞中具有NK細胞表型(CD2+/

3、CD8+/CD3-)的細胞比例較最初分離的淋巴細胞提高5.59倍;熒光定量PCR結(jié)果也表明，NK細胞相關(guān)的其它表面標(biāo)志(CD2、CD3、CD8α、SLA與PRF1)的表達也在培養(yǎng)第5天達到了頂峰，與流式細胞術(shù)結(jié)果一致。
　　(3)豬CIK細胞毒活性實驗結(jié)果表明，誘導(dǎo)培養(yǎng)第5d的CIK細胞在效靶比為12∶1時達到對腫瘤細胞系(YAC-1)最佳的殺傷活性，殺傷率達到近80％;而最初分離的淋巴細胞對YAC-1的殺傷率僅為56.86％。<