CIK細(xì)胞體外殺傷人肝癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行論述：
　　第一部分：CIK細(xì)胞的培養(yǎng)及表型鑒定
　　目的：探討CIK細(xì)胞的培養(yǎng)及體外增值方法，觀察CIK細(xì)胞體外增值的規(guī)律并對(duì)其進(jìn)行表型分析。
　　方法：從健康志愿者肘靜脈抽取外周血，密度梯度離心，分離出單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），將該細(xì)胞種植于CD3單克隆抗體及包被的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。然后在培養(yǎng)基里加入重組人IFN-γ、IL-1α和IL-2。第0天、第3天、第6天、第9天、第12天、第15、第18

2、天和第21天時(shí)分別用抗人CD3-FITC，抗人CD56-PE標(biāo)記CIK細(xì)胞，然后上流式細(xì)胞儀進(jìn)行測(cè)定CD3+、CD56+細(xì)胞比例
　　結(jié)果：CIK細(xì)胞在最初的三天增殖相對(duì)緩慢，至第15天增殖速度達(dá)到頂峰，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，CD3CD56雙陽(yáng)性的比例逐漸升高。
　　結(jié)論：CIK細(xì)胞體外培養(yǎng)方法可靠，具有明顯的活性，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，CIK細(xì)胞的倍增明顯。
　　第二部分：CIK細(xì)胞體外殺傷人肝癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究
　　目

3、的：將培養(yǎng)成功的CIK細(xì)胞與人肝癌細(xì)胞共培養(yǎng)，分析CIK細(xì)胞對(duì)人肝癌細(xì)胞增殖、凋亡以及克隆形成的影響，更好地為臨床治療HCC提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：將CIK細(xì)胞分別與三種人肝癌細(xì)胞系（HepG2,Hep3B和Huh7細(xì)胞）在同一培養(yǎng)體系內(nèi)共同培養(yǎng)24h及48h。采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)CIK細(xì)胞的表型進(jìn)行分析，CCK-8法檢測(cè)人肝癌細(xì)胞的增殖情況。通過(guò)軟瓊脂平板細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)分析人肝癌細(xì)胞的克隆形成能力，使用Annexin V-PI雙

4、染法檢測(cè)肝癌細(xì)胞的凋亡情況。RT-PCR法和Westen blotting法分別檢測(cè)凋亡分子Bax和Caspase-3的mRNA及蛋白水平表達(dá)情況。
　　結(jié)果：體外培養(yǎng)的CIK細(xì)胞可明顯抑制三種肝癌細(xì)胞系的生長(zhǎng)，克隆形成能力減弱，導(dǎo)致肝癌細(xì)胞系的凋亡（凋亡細(xì)胞比例增加，凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表達(dá)水平升高），并且對(duì)HepG2肝癌細(xì)胞系的抑制效果較Hep3B和Huh7兩種肝癌細(xì)胞系更加明顯。
　　結(jié)論：在體外，CI