2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 采用CCK-8檢測自體/異體抗原負載的DC與CIK共培養(yǎng)以及無抗原負載的DC與CIK共培養(yǎng)、單獨培養(yǎng)CIK對自體原代培養(yǎng)腎癌細胞的殺傷活性,探討腎癌免疫治療體外不同免疫細胞殺瘤活性差異,為臨床上腫瘤抗原不明確的腎癌免疫治療提供一種新的研究思路。 方法: 一、腎癌細胞培養(yǎng)及腫瘤胞抗原制備 采用組織塊貼壁法、機械分散法及差速貼壁分離法,混合酶消化法及差速貼壁分離法分離腎癌細胞,比較這幾種方法培養(yǎng)腎癌細

2、胞的優(yōu)劣并優(yōu)化,體外培養(yǎng)出實驗所需短期原代腎癌細胞。超聲破碎法獲取原代培養(yǎng)腎癌細胞自體腫瘤細胞全抗原,反復凍融法獲取異體腎癌細胞系769-P腫瘤細胞全抗原。 二、DC、CIK的體外誘導擴增、抗原負載及表型檢測 分離自體及健康供外周血單個核細胞體外誘導制備DC、CIK細胞。于第8d天收集DC、CIK細胞,進行共培養(yǎng),分為無抗原DC組,自體腫瘤全細胞抗原遞呈DC組,異體腫瘤細胞裂解物抗原遞呈DC組,以10:1的比例與培養(yǎng)至第

3、8d的CIK混合培養(yǎng),三天后進行靶細胞殺傷實驗。流式細胞儀檢測DC表面成熟標志CD83、CD80、CD86、HLA-DR的表達,CIK細胞檢測CD3、CD4、CD8、CD56的表達。 三、DC-CIK誘導的特異性殺傷作用檢測 應用CCK-8法檢測CIK,CIK-DC,CIK-DC-自體A,CIK-DC-異體A分別對腎癌細胞系769-P及原代培養(yǎng)腎癌細胞的殺瘤活性。 結(jié)果: 一、腎癌細胞培養(yǎng) 三種培

4、養(yǎng)方法比較,組織塊貼壁法分離的細胞損傷最小,且細胞狀態(tài)好,但細胞種類多,純化困難,生長時間長;機械分離法細胞損傷最重,細胞種類多,但生長時間比組織塊貼壁法短;混合酶消化法所得的細胞損傷程度次之,分步貼壁后可獲得較純的腫瘤細胞,培養(yǎng)生長時間最短,后續(xù)時間均采用此法提取培養(yǎng)腎癌細胞。所有實驗均采用生長狀態(tài)最佳的第三代細胞;100mg腎癌組織經(jīng)超聲破碎后可獲取30~50mg全細胞抗原;1瓶長滿的腎癌細胞(1~3×107)提取出的全抗原約為30

5、~60mg。 二、DC、CIK的體外培養(yǎng)及抗原檢測 外周血單個核細胞,經(jīng)GM-CSF、IL-4誘導可獲得5%~10%的成熟DC。加入腫瘤裂解物抗原及誘導成熟因子后,DC表面成熟標志CD83、CD80、CD86、HLA-DR的表達明顯增加。與DC共培養(yǎng)CIK表面抗原CD3+、CD3+ CD4+、CD3+CD56+、CD3+CD8+均比單獨培養(yǎng)CIK高。 三、DC-CIK誘導的特異性殺傷作用 結(jié)果:顯示,自體

6、全抗原刺激的CIK-DC-自體A組與與異體全抗原刺激的CIK-DC-異體A組殺瘤活性最大,兩者之間無差異,未經(jīng)抗原刺激的CIK-DC組次之,單純CIK組殺瘤活性最低;四組效應細胞組間殺傷率相關(guān)性分析顯示,除CIK-DC-自體A組與CIK-DC-異體A組之間差異無統(tǒng)計學意義外,各組間差異均顯著,各組之間殺傷率比較具有正相關(guān)關(guān)系;健康組與患者組效應細胞殺傷活性比較,腎癌患者外周血殺瘤活性比健康供者殺瘤活性低,有統(tǒng)計學意義;原代培養(yǎng)腎癌細胞患

7、者自體效應細胞殺傷實驗組與原代培養(yǎng)腎癌細胞患者異體健康效應細胞殺傷實驗組比較,腎癌細胞患者自體效應細胞與異體健康效應細胞差別無統(tǒng)計學意義;此外,各實驗組間兩兩比較,差異顯著,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結(jié)論: 1、自體全抗原或異體全抗原刺激的DC以及無處理因素刺激的DC與CIK共培養(yǎng)后,CIK細胞在免疫表型,增殖及殺瘤能力都有明顯提高; 2、DC細胞經(jīng)自體全抗原或異體全抗原刺激后,免疫表型及增值能力均提高,與

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