耳聾基因診斷的臨床實踐.pdf

1、全國性聾病分子流行病學研究數(shù)據(jù)顯示，盡管遺傳性耳聾具有廣泛的遺傳異質性，但大多數(shù)非綜合征性遺傳性耳聾僅由為數(shù)不多的幾個基因突變所致，從而奠定了在中國開展耳聾基因診斷的理論基礎，同時也催生出新的耳聾整體預防思路和方法。本課題致力于通過建立標準化、規(guī)范化的耳聾基因診斷、遺傳咨詢和產前診斷模式，使耳聾基因組研究所取得的偉大成果能夠被廣泛應用于中國臨床遺傳性耳聾病因學診斷和聾兒出生缺陷防控的實踐，實現(xiàn)其“基礎→臨床”的順利轉化，從而推動國內臨床

2、耳聾基因診斷、遺傳咨詢和基于耳聾基因診斷的產前診斷工作的廣泛開展，最終實現(xiàn)總體降低耳聾發(fā)生及出生缺陷的目標。 第一部分：耳聾基因診斷及遺傳咨詢的臨床應用 一、聾病分子診斷實驗室的規(guī)范化建設臨床遺傳學實驗室是聾病分子診斷的基地，其臨床的主體功能是向需求者提供包括實驗室診斷和提供遺傳咨詢的臨床遺傳服務。由于國內尚無專門針對臨床分子遺傳學檢測實驗室進行資格認證的機構和法規(guī)，因此，借鑒國外的先進經驗和辦法，結合國情，按照國內現(xiàn)行

3、的臨床基因擴增檢驗實驗室的法律法規(guī)，發(fā)展自己的聾病分子診斷實驗室規(guī)范化建設方案，不失為一個行之有效的方法，并將為該領域在我國健康發(fā)展奠定堅實的基礎。 本研究依據(jù)解放軍聾病分子診斷中心成立后的大量臨床實踐，結合國內相應的法規(guī)，在實驗室的硬件建設(場地和設備)、軟件建設(人員配備，檢測內容)，以及質量管理等方面提出規(guī)范化建設的思路，以期為國內聾病分子診斷實驗室規(guī)范化、標準化建設起到拋磚引玉的作用。 二、臨床非綜合征性耳聾的基

4、因診斷 自2002年初，解放軍總醫(yī)院聾病分子診斷中心開始常見耳聾基因診斷的臨床實踐，截至2008年4月20日，已有3202人接受了耳聾基因診斷。本節(jié)對這一實踐進行全面、系統(tǒng)地總結和討論，以推動臨床耳聾基因診斷的規(guī)范化實踐，使其得到更為廣泛和深入的臨床應用。其中，著重論述臨床耳聾基因診斷的規(guī)范化流程，以及檢測內容、策略和方法，分析GJB2、SLC26A4、線粒體DNA1494/1555突變在不同受檢者群體中的陽性檢出率情況，分析G

5、JB2基因和大前庭水管綜合征相關SLC26A4基因的基因型和表型以及它們之間的關系，繪制GJB2相關耳聾和EVAS的聽力曲線模型，并討論在臨床耳聾基因診斷過程中需要注意的一些具體問題。 三、非綜合征性耳聾的遺傳咨詢和產前診斷 遺傳咨詢是遺傳學服務中極為重要的過程和內容，與耳聾基因診斷是不可分割的整體。而基于耳聾基因診斷的產前診斷可以從根本上預防和阻斷遺傳耳聾，成為實現(xiàn)“預防耳聾出生缺陷”目標的重要步驟和手段。本研究通過對

6、3000余人的耳聾相關遺傳咨詢實踐，以及為34個家庭實施的共37次產前診斷實踐，建立了針對非綜合征性感音神經性耳聾的基于耳聾基因診斷的遺傳咨詢和產前診斷的規(guī)范化流程和內容，討論了知情同意在遺傳咨詢中的重要作用。 四、臨床耳聾基因診斷信息管理系統(tǒng)(LIMS)的構建 為順應醫(yī)學信息化、網(wǎng)絡化的時代要求，我們同北京瑞林薩爾科技有限公司合作，根據(jù)耳聾基因診斷臨床實踐的具體要求，在Linux+Apache+PHP+PostgreS

7、QL的系統(tǒng)平臺上，采用B/S分布式數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)，研發(fā)了國內的首套《耳科患者信息管理系統(tǒng)》。在使用過程中，該系統(tǒng)表現(xiàn)出功能豐富、安全穩(wěn)定、操作直觀快捷、可擴展性強、維護方便、成本低廉等優(yōu)點，初步實現(xiàn)了對實驗室信息的高效、準確的數(shù)字化、網(wǎng)絡化管理的目標，并為實現(xiàn)系統(tǒng)升級，構建多中心會診模式的數(shù)據(jù)交換，以及與HIS系統(tǒng)和檢測設備接口進行無縫連接打下了良好的基礎和框架。此套軟件系統(tǒng)，以及在研發(fā)過程中臨床醫(yī)生與軟件設計公司建立的良好合作模式將為進一

8、步發(fā)展更加先進和完善的實驗室網(wǎng)絡化信息管理系統(tǒng)奠定了堅實的基礎。 第二部分：基因芯片技術在耳聾基因診斷中的應用 一、基因芯片技術的臨床應用可行性研究 本課題組與博奧生物有限公司合作，在大規(guī)模全國聾病分子流行病學調查數(shù)據(jù)基礎上，針對國人非綜合征性耳聾的突變熱點，將等位基因特異性引物延伸PCR與通用芯片相結合，合作開發(fā)出一款遺傳性耳聾基因診斷芯片。為評估其在臨床應用的可行性，我們應用耳聾基因芯片對158名非綜合征性感

9、音神經性耳聾患者進行分子病因學研究。前者可以同時檢測四個國人中常見的耳聾相關基因中的9個熱點突變，包括GJB2(35delG，176del16bp，235delC及299300delAT)，GJB3(538C＞T及547G＞A)，SLC26A4(IVS7-2A＞G、2168A＞G)和線粒體DNA12S rRNA(A1555G)。 同時，應用酶切方法或直接測序的方法分別對以上基因編碼區(qū)序列進行平行檢測，以驗證基因芯片結果的準確性。

10、結果顯示，除兩例純合235delC被判讀為雜合外，基因芯片的結果同酶切及測序方法結果一致，后者的陽性患者檢出率為70例(44.3％)，與芯片檢測結果相比無統(tǒng)計學差異(p=0.250)。本研究顯示，針對國人常見耳聾相關基因熱點突變設計的耳聾基因芯片對非綜合征性重度和極重度耳聾患者的突變檢出率高(42.41％)。與傳統(tǒng)方法相比，它具有快速、高通量、高準確性、低成本等特點，能夠滿足臨床對基因檢測的要求；且其操作簡單，易于標準化，適于推廣，因而

11、顯示出廣闊的臨床應用前景。 二、基因芯片技術在非綜合征性耳聾臨床快速基因診斷中的應用 為進一步提高檢出率和降低成本，我們去除了原有芯片上的GJB2167delT和SLC26A4707T＞C位點，增加了線粒體DNA1494C＞T突變位點，評估調整后的基因芯片在臨床快速耳聾基因診斷中的作用。 結果顯示，基因芯片能夠檢出76％的大前庭水管綜合征患者，與測序方法(95％)存在差距。研究提示，測序仍是大前庭水管綜合征基因診

12、斷必不可少的檢測方法，基因芯片應與測序相結合，共同構建臨床耳聾基因診斷平臺，后者能更好地將基因芯片的快速、經濟、高通量的優(yōu)勢與測序的高準確性和高檢出率的優(yōu)勢相結合；另外，在討論部分，我們根據(jù)遺傳學規(guī)律對不同的芯片檢測結果做出了規(guī)范化的臨床遺傳學解釋；在芯片檢測位點的增加、芯片系統(tǒng)的微型化以及芯片標記技術三個方面對耳聾基因診斷芯片的進一步開發(fā)進行了展望。最后，對耳聾基因組學與納米芯片技術相結合，構建防聾體系所產生的巨大的社會和經濟效益進行

13、了評估。 第三部分：耳聾基因診斷的推廣普及 為使耳聾基因診斷理論和技術能及早為更多的醫(yī)務工作者、聽障患者及其家屬了解和使用，我們通過加強門診和病房的宣傳、聾校宣教、開辦全國耳聾基因診斷學習班、創(chuàng)建國內首個耳聾基因診斷博客和首個耳聾基因診斷網(wǎng)站、與民間聾人論壇建立合作關系，以及利用新聞媒體、發(fā)表論文、參加學術會議等各種方式和方法，對不同層面的對象如醫(yī)務工作者、聽障患者和計生委等婦幼保健者以及與診聾、防聾事業(yè)相關人士進行全方