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文檔簡介
1、目的:喉癌(carcinoma of the larynx)是頭頸部常見的惡性腫瘤,約占頭頸腫瘤的13.9%,占全身惡性腫瘤的2.1%。喉部惡性腫瘤中96%~98%為鱗狀細(xì)胞癌。近年來喉癌的發(fā)病率有明顯增加的趨勢。喉鱗狀細(xì)胞癌的病因迄今尚未完全明了,目前認(rèn)為與性別,吸煙,空氣污染,喉白斑病等有關(guān),但現(xiàn)在越來越多的認(rèn)為與基因表達(dá)改變有關(guān)。
癌基因MDM2是一種進(jìn)化保守基因,MDM2首先在自發(fā)轉(zhuǎn)化的BALB/C細(xì)胞中發(fā)生基因擴(kuò)
2、增被發(fā)現(xiàn)。Rb蛋白是從視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中發(fā)現(xiàn)并克隆出的第一個(gè)人類腫瘤抑制基因,在對細(xì)胞生長的調(diào)控中,Rb蛋白的去磷酸化狀態(tài)是維持細(xì)胞在G0或G1期的活化形式,抑制和控制細(xì)胞生長和增殖,而磷酸化的Rb蛋白將細(xì)胞由這種控制中釋放出來,使細(xì)胞進(jìn)入DNA合成及有絲分裂期。SV40LT Ag與其它癌基因在DNA病毒的復(fù)制與轉(zhuǎn)化中起重要作用,他們與Rb蛋白的結(jié)合,使人們對這些能與腫瘤抑制蛋白相結(jié)合的癌蛋白的真核細(xì)胞同源性發(fā)生了興趣,MDM2蛋白同SV
3、40L Ag相似,可以抑制Rb的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能。但是目前對于MDM2與Rb之間的關(guān)系還不清楚。
本實(shí)驗(yàn)主要研究MDM2蛋白和Rb蛋白在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況,通過觀察MDM2蛋白和Rb蛋白在喉鱗癌,癌前病變,聲帶息肉,癌旁正常喉粘膜組織中的表達(dá),借以初步探討其腫瘤特異性及其與喉鱗癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性,并探尋喉癌早期診斷、腫瘤病理分級(jí)及其臨床分期評(píng)估的參考指標(biāo),為臨床制定治療方案提供分子生物學(xué)參考依據(jù)。
方
4、法:選擇河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院耳鼻喉科2008-2009年有完整臨床病例資料,均經(jīng)病理檢查證實(shí)的手術(shù)切除標(biāo)本共70例,喉鱗狀細(xì)胞癌組40例,癌周正常組織組取10例(距腫瘤>0.5cm),聲帶息肉組10例,癌前病變組10例(成人型喉乳頭狀瘤10例)。其中喉鱗狀細(xì)胞癌組40例患者均為男性,年齡54-71歲,平均62.57歲,術(shù)前均未接受放療和化療,經(jīng)病理證實(shí)均為喉鱗狀細(xì)胞癌組織,按2002年國際抗癌聯(lián)盟(UICC)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床特征分期,其中Ⅰ
5、期5例,Ⅱ期7例,Ⅲ期16例,Ⅳ12例;按腫瘤分化程度將其分級(jí),其中高分化18例,中分化12例,低分化10例。每例手術(shù)標(biāo)本取材后即放入10%的福爾馬林固定液,常規(guī)石蠟包埋,以5μm厚度連續(xù)切片,石蠟切片經(jīng)常規(guī)二甲苯脫蠟,梯度酒精至水,去除內(nèi)源性過氧化物酶,微波抗原修復(fù),SP法分別行MDM2和RB免疫組織化學(xué)染色檢測。DAB顯色,蘇木精復(fù)染,切片脫水、透明、樹膠封片。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行
6、分析,數(shù)據(jù)比較采用X2檢驗(yàn),MDM2蛋白和Rb蛋白的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果:MDM2蛋白的陽性表達(dá)在癌周正常組織、聲帶息肉、喉癌前病變與喉鱗癌組之間均有顯著性差異,呈升高趨勢。
Rb蛋白的陽性表達(dá)在癌周正常組織、聲帶息肉、喉癌前病變與喉鱗癌組之間均有顯著性差異,呈降低趨勢。
MDM2蛋白的陽性表達(dá)在高分化、中分化、低分化喉鱗癌之間有顯著性
7、差異,呈升高趨勢。
RB蛋白的陽性表達(dá)在高分化、中分化、低分化喉鱗癌之間有顯著性差異,呈降低趨勢。
MDM2蛋白的陽性表達(dá)在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期喉鱗癌間有顯著性差異,呈升高趨勢。
Rb蛋白的陽性表達(dá)在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期喉鱗癌間有顯著性差異,呈降低趨勢。
MDM2蛋白的過度表達(dá)和Rb蛋白的失活和喉癌的發(fā)展密切相關(guān),呈負(fù)相關(guān)性。
結(jié)論:MDM2蛋白在癌周正常組織、聲帶息肉、喉癌
8、前病變與喉鱗癌中的陽性表達(dá)升高,Rb蛋白在癌周正常組織、聲帶息肉、喉癌前病變與喉鱗癌中的陽性表達(dá)降低,二者在喉鱗癌的表達(dá)具有負(fù)相關(guān)性,因此二者相結(jié)合可作為喉癌早期診斷的指標(biāo)。
MDM2蛋白在喉鱗癌病理分級(jí)高分化、中分化、低分化的陽性表達(dá)和在臨床特征分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的陽性表達(dá)依次升高,Rb蛋白在喉鱗癌病理分級(jí)高分化、中分化、低分化的陽性表達(dá)和在臨床特征分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的陽性表達(dá)依次降低,通過檢測喉鱗癌中MDM2蛋白和
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