Pokemon、MDM2和p53蛋白在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的:中國(guó)是世界上食管癌高發(fā)病率及死亡率的國(guó)家。多年來(lái)，食管癌的發(fā)病率和死亡率居高不下，嚴(yán)重威脅國(guó)民的生命健康。與歐美國(guó)家不同，中國(guó)居民的食管癌病理組織學(xué)類(lèi)型主要為鱗狀細(xì)胞癌，占90％以上。目前公認(rèn)，早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療即“三早”是食管癌防治的最有效措施，而早期發(fā)現(xiàn)和早期診斷是實(shí)現(xiàn)早期治療的關(guān)鍵。目前臨床上常用的單一腫瘤標(biāo)志物對(duì)于食管癌的早診價(jià)值有限，更多的研究聚焦于多腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)提高早期診斷率。因此，本研究將食管鱗癌作為

2、研究對(duì)象，選取 Pokemon→ARF→MDM2→wtp53（野生型 p53）致癌通路中的Pokemon、MDM2和p53（包括野生型 p53、突變型 p53）蛋白為研究指標(biāo)，采用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶連接(SP)法檢測(cè)食管鱗癌組織與癌旁正常食管組織中Pokemon、MDM2和p53蛋白的表達(dá)情況，分析三者與臨床病理特征之間的關(guān)系，探討其臨床意義。
　　方法:
　　1、食管鱗癌組織和正常對(duì)照組織來(lái)源于201

3、0年1月至2014年12月期間，在河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院行手術(shù)治療的62例食管鱗癌患者，術(shù)前均未進(jìn)行化療、放療和其他與抗腫瘤相關(guān)的治療。其中男性39例，女性23例；年齡48歲～75歲，平均年齡63.13±5.67歲。全部研究對(duì)象均經(jīng)我院病理科兩位高年資醫(yī)師獨(dú)立做出診斷，診斷一致者納入研究范圍。分組情況：食管鱗癌組62例（手術(shù)切除的腫瘤組織）；對(duì)照組標(biāo)本選取上述患者的癌旁正常食管黏膜組織35例（距離食管癌組織邊緣5厘米以上）。高分化鱗癌10

4、例，中分化鱗癌28例，低分化鱗癌24例。侵及纖維膜36例，未侵及纖維膜26例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例。臨床TNM分期I+II期42例，III+IV期20例。
　　2、常規(guī)組織學(xué)處理所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色供病理學(xué)觀察。腫瘤組織學(xué)分級(jí)根據(jù)美國(guó)聯(lián)合癌癥委員會(huì)（AJCC）/國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）2009年制訂的第七版食管鱗狀細(xì)胞癌TNM分期系統(tǒng)。
　　3、免疫組織化學(xué)檢測(cè)

5、石蠟包埋組織以厚度4um連續(xù)切片，烤箱過(guò)夜(60℃~65℃)，常規(guī)脫蠟，應(yīng)用檸檬酸修復(fù)液煮沸修復(fù)，采用免疫組化法(SP)染色，嚴(yán)格按照免疫組化試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行， DAB顯色、蘇木素復(fù)染，已知Pokemon蛋白、MDM2蛋白、p53蛋白陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照以PBS液代替一抗。
　　4、結(jié)果判定采用雙盲法顯微鏡下觀察結(jié)果。Pokemon蛋白、MDM2蛋白、p53蛋白為細(xì)胞核染色。陽(yáng)性判定以染色強(qiáng)度結(jié)合陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)綜合判定。<

6、br>　　5、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS16.0軟件，計(jì)數(shù)資料組間比較采用?2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；相關(guān)性檢測(cè)使用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、 Pokemon蛋白組間表達(dá)及與臨床病理特征間關(guān)系
　　1.1、 Pokemon蛋白組間比較情況：Pokemon蛋白在食管鱗癌組中及癌旁正常對(duì)照組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為67.74%（42/62）、42.86%（15/35），食管鱗癌

7、組中陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。
　　1.2、食管鱗癌中Pokemon蛋白的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系：食管鱗癌組中Pokemon蛋白的表達(dá)與食管鱗癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期明顯相關(guān)（P<0.05），其陽(yáng)性表達(dá)在低分化鱗癌顯著高于高中分化鱗癌，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，臨床 III+IV期患者明顯高于 I+II期患者；與患者性別、年齡及是否侵及纖維膜無(wú)明顯相關(guān)性（

8、P>0.05）。
　　2 MDM2蛋白組間表達(dá)及與臨床病理特征間關(guān)系
　　2.1、 MDM2蛋白組間比較情況：MDM2蛋白在食管鱗癌組中及癌旁正常對(duì)照組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為54.84%（34/62）、28.57%（10/35），食管鱗癌組中陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。
　　2.2、食管鱗癌中MDM2蛋白的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系：食管鱗癌組中MDM2蛋白的表達(dá)與食管鱗癌分化

9、程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期明顯相關(guān)（P<0.05），其陽(yáng)性表達(dá)在低分化鱗癌顯著高于高中分化鱗癌，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，臨床 III+IV期患者明顯高于 I+II期患者；與患者性別、年齡及是否侵及纖維膜無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。
　　3、 p53蛋白組間表達(dá)及與臨床病理特征間關(guān)系
　　3.1、 p53蛋白組間比較情況：p53蛋白在食管鱗癌組中及癌旁正常對(duì)照組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為72.58%（45/62

10、）、17.14%（6/35），食管鱗癌組中陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。3.2食管鱗癌中p53蛋白的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系：食管鱗癌組中p53蛋白的表達(dá)與食管鱗癌分化程度、是否侵及纖維膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期明顯相關(guān)（P<0.05），其陽(yáng)性表達(dá)在低分化鱗癌顯著高于高中分化鱗癌，侵及纖維膜者明顯高于纖維膜未受侵者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，臨床 III+IV期患者明顯高于 I

11、+II期患者；與患者性別、年齡無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。
　　4、 Pokemon、MDM2和p53蛋白的相關(guān)性
　　Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示，食管鱗癌組中Pokemon與MDM2蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.599, P<0.01)；Pokemon與 p53蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.501, P<0.01)；MDM2與p53蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.359, P<0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、 Po

12、kemon、MDM2、mtp53（突變型 p53）蛋白在食管鱗癌中陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于癌旁正常食管黏膜組，提示Pokemon、MDM2、mtp53蛋白在食管鱗癌發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮致癌作用，有潛力成為早期診斷食管鱗癌的腫瘤標(biāo)記物。
　　2、 Pokemon、MDM2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與食管鱗癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)，mtp53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與食管鱗癌分化程度、腫瘤是否侵及纖維膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期均相關(guān)，提示Pokemon