CD4~+CD25~+Foxp3~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與肺癌的臨床分期及化療關(guān)系的研究.pdf

1、背景和目的：
　　近期研究發(fā)現(xiàn)一類(lèi)具有獨(dú)特免疫調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞,在維持機(jī)體免疫自穩(wěn)、調(diào)控免疫應(yīng)答方面起著重要作用,稱(chēng)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells,Treg cell,簡(jiǎn)稱(chēng)Treg)。因發(fā)現(xiàn)它與自身免疫性疾病的發(fā)生和腫瘤的免疫抑制密切相關(guān),近來(lái)受到人們的廣泛關(guān)注,成為各學(xué)科研究的熱點(diǎn)之一。
　　CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg為目前研究得較為清楚的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的一個(gè)亞群,Foxp3蛋白特異性地

2、表達(dá)于CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg細(xì)胞,是調(diào)控其分化、發(fā)育的重要轉(zhuǎn)錄因子,也是其特異性標(biāo)志。因?qū)D4~+CD25~+Foxp3~+Treg研究較多也較成熟,許多文獻(xiàn)中Treg細(xì)胞特指CD4~+CD25~+Foxp3~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,本文中Treg細(xì)胞也特指的是CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg。
　　自1995年Sakaguchi等首次提出CD4~+CD25~+Treg的概念以來(lái),愈來(lái)愈多的研究和發(fā)現(xiàn)證

3、明Treg細(xì)胞在生理和病理狀態(tài)下均具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用,尤其在病理情況下,它與自身免疫性疾病的發(fā)生和腫瘤的免疫抑制密切相關(guān),研究發(fā)現(xiàn)一方面腫瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生一系列逃避抗腫瘤免疫反應(yīng)的機(jī)制;另一方面,正常的T細(xì)胞中包含有Treg細(xì)胞,Treg細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫耐受的作用很可能影響著免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤抗原的應(yīng)答,從而影響著腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。
　　已有多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)了腫瘤與Treg細(xì)胞的關(guān)系,在胃癌、食管癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌等不同惡性腫瘤

4、患者的外周血淋巴細(xì)胞和腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中,存在著CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg細(xì)胞比例明顯升高,FOXP3表達(dá)上調(diào)的現(xiàn)象,使機(jī)體增強(qiáng)了對(duì)腫瘤抗原的耐受能力并抑制機(jī)體產(chǎn)生有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答,導(dǎo)致腫瘤患者免疫功能處于低下?tīng)顟B(tài),從而引起機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生免疫忽視或豁免,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能發(fā)揮著重要的作用。
　　惡性腫瘤嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的生命與健康,肺癌是最常見(jiàn)的肺原發(fā)性惡性腫瘤,近50年來(lái)世界各國(guó)特別是工業(yè)發(fā)達(dá)國(guó)家

5、,肺癌的發(fā)病率和病死率均迅速上升,死于癌癥的男性患者中肺癌已居首位。目前肺癌已成為全球范圍內(nèi)發(fā)病率最高的癌癥,也是我國(guó)發(fā)病率位居首位的難治性腫瘤之一。
　　肺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后與免疫功能密切相關(guān),且多項(xiàng)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)腫瘤患者的免疫功能常處于低下?tīng)顟B(tài)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),,在肺癌模型的外周血及腫瘤組織中Treg細(xì)胞比例明顯升高,進(jìn)一步研究顯示Treg細(xì)胞主要是通過(guò)細(xì)胞與細(xì)胞間接觸、分泌抑制性細(xì)胞因子等方式發(fā)揮免疫抑制效應(yīng),從而抑制自身反應(yīng)

6、性T細(xì)胞和輔助T細(xì)胞的活化,即對(duì)CD4~+和CD8~+T細(xì)胞均有抑制作用,抑制機(jī)體產(chǎn)生有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答,使腫瘤患者免疫功能處于低下?tīng)顟B(tài),導(dǎo)致惡變細(xì)胞逃脫了機(jī)體的免疫監(jiān)視,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著不可忽視的作用。
　　放、化療是常用的腫瘤治療手段,但放、化療不僅對(duì)腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用,而且對(duì)正常的淋巴細(xì)胞亦殺傷,淋巴細(xì)胞是機(jī)體的主要免疫細(xì)胞,淋巴細(xì)胞減少會(huì)引起腫瘤免疫功能降低,因Treg細(xì)胞是淋巴細(xì)胞的一個(gè)亞型,但它本身可以引

7、起腫瘤免疫耐受導(dǎo)致患者的腫瘤免疫處于抑制狀態(tài),由于Treg細(xì)胞與腫瘤免疫抑制關(guān)系密切,所以Treg細(xì)胞與腫瘤化療是否有關(guān)值得進(jìn)一步的研究探討。
　　目前尚沒(méi)有關(guān)于Treg細(xì)胞與肺癌病人臨床分期及化療關(guān)系的研究,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)肺癌患者化療前后外周血Treg細(xì)胞的變化,研究Treg細(xì)胞與肺癌的臨床分期及化療療效是否有關(guān),并進(jìn)一步探討其臨床意義。
　　方法：
　　1.收集經(jīng)病理確診的初治肺癌病人61例,正常志愿者15例設(shè)為對(duì)

8、照。
　　2.抽取肺癌患者化療前及化療兩個(gè)周期后(并對(duì)化療兩個(gè)周期后的治療進(jìn)行療效評(píng)價(jià))空腹時(shí)的外周靜脈血3ml,處理后凍存?zhèn)溆谩?br>　　3.將凍存血去除紅細(xì)胞后,用熒光標(biāo)記的單克隆抗體(FITC標(biāo)記的鼠抗人CD4~+,PE-Cy5標(biāo)記的鼠抗人CD25~+,PE標(biāo)記的鼠抗人FOXP3~+)對(duì)樣本進(jìn)行染色。
　　4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)Treg細(xì)胞占CD4~+T細(xì)胞的比值。
　　5.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)

9、數(shù)據(jù)處理分析。兩樣本均數(shù)比較用t檢驗(yàn),多個(gè)樣本均數(shù)兩兩比較采用單因素方差分析,a=0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.肺癌患者外周血Treg細(xì)胞占CD4~+T細(xì)胞的比值(9.28±2.10)％明顯高于健康對(duì)照組(2.63±1.28)％,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　2.Ⅲ+Ⅳ期的(12.64±3.38)％明顯高于Ⅰ+Ⅱ期(6.84±2.19)％,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　

10、3.化療病人測(cè)定的結(jié)果:3.1治療有效病例(PR):Treg細(xì)胞所占比例化療后較化療前降低(化療前:11.94±2.41,化療后:9.27±1.64),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。3.2穩(wěn)定和進(jìn)展病例(SD+PD):化療后較化療前比例卻升高(化療前:12.35±2.83,化療后:13.46±2.52),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3.3化療后不同療效PR與SD+PD進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)PR的平均比值(9.27±2.64)

11、％較SD+PD(13.46±2.52)％明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。說(shuō)明有效的化療(PR)Treg細(xì)胞比值下降,療效差的(SD+PD)Treg細(xì)胞比值不降反而進(jìn)一步升高?；熃M中療效穩(wěn)定和進(jìn)展病例(SD+PD)Treg細(xì)胞比值明顯高于治療有效病例PR。
　　結(jié)論：
　　1.肺癌患者外周血中Treg細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例較正常人明顯升高,且分期越高該比值增加越明顯。
　　2.對(duì)于化療病人:化療有效病例