轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3、FoxP3及CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在兒童過(guò)敏性紫癜發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、目的:本研究旨在探討轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3在兒童過(guò)敏性紫癜(HSP)發(fā)病機(jī)制中的作用以及CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及其轉(zhuǎn)錄因子FoxP3與兒童過(guò)敏性紫癜發(fā)病的關(guān)系,更深層次闡明兒童過(guò)敏性紫癜急性期Th1／Th2失衡的分子機(jī)制,并從調(diào)節(jié)性T細(xì)胞角度及其調(diào)控的分子機(jī)制探討過(guò)敏性紫癜的發(fā)病機(jī)理,為兒童過(guò)敏性紫癜(尤其是重型過(guò)敏性紫癜)的治療從分子水平作為切入點(diǎn)提供一條新思路和新策略。
　　 方法:研究對(duì)象為我院兒科200

2、9年2月-2010年2月收治的急性期過(guò)敏性紫癜患兒46例(HSP組)以及健康對(duì)照兒童30例(對(duì)照組),兩組比較在年齡、性別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1、采用SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞T-bet、GATA-3及FoxP3 mRNA的表達(dá)。2、采用Luminex-100液相芯片技術(shù)檢測(cè)血漿細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ的水平。采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測(cè)血漿TGF-β1的水平。3、運(yùn)用

3、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血中T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+CD25+及B淋巴細(xì)胞CD19+的表達(dá)。4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,對(duì)實(shí)驗(yàn)所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),由于轉(zhuǎn)錄因子及細(xì)胞因子的數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布,經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后呈對(duì)數(shù)正態(tài)分布,且方差齊。以上各指標(biāo)均采用Independeng-Samples T Test比較兩組間差異,數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示。
　　 結(jié)果:

4、1、HSP組患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞GATA-3 mRNA相對(duì)表達(dá)水平(964.3±655.18)顯著高于對(duì)照組兒童相對(duì)表達(dá)水平(78.09±57.20)(P<0.01)。2、HSP組患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞T-bet mRNA相對(duì)表達(dá)水平(53.98±35.79)低于對(duì)照組兒童外周血單個(gè)核細(xì)胞T-bet mRNA相對(duì)表達(dá)水平(181.56±96.90)(P<0.01)。HSP組患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞FoxP3mRNA相對(duì)表達(dá)水平(32.17±2

5、3.04)低于對(duì)照組兒童外周血單個(gè)核細(xì)胞FoxP3 mRNA相對(duì)表達(dá)水平(147.91±99.15)(P≤0.01)。HSP組中9例有腎損害,其轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3、FoxP3 mRNA相對(duì)表達(dá)水平分別為54.23±27.64、966.31±594.11、34.13±21.26,HSP組中37例無(wú)腎損害,其轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3、FoxP3 mRNA相對(duì)表達(dá)水平分別為49.79±31.25、951.31±632.4

6、8、30.21±19.78,兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3、HSP組血漿細(xì)胞因子的IL-2、IL-10、IFN-γ的水平分別為:16.54±7.38 pg／ml、59.30±40.31 pg／ml、11.31±8.02 pg／ml。對(duì)照組血漿細(xì)胞因子IL-2、IL-10、IFN-γ的表達(dá)分別為:35.73±22.66 pg／ml、135.42±93.15 pg／ml、30.67±21.29pg／ml。HSP組較對(duì)照組降低,兩

7、組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。HSP組血漿細(xì)胞因子IL-4(74.66±26.15 pg／ml)、TGF-β1(488.02±193.08 pg／ml)的表達(dá)水平較對(duì)照組IL-4(51.81±27.76 pg／ml)、TGF-β1(273.03±185.79pg／ml)增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。HSP組中9例有腎損害,其血漿細(xì)胞因子IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-4、TGF-β1的水平分別17.28±6.

8、54pg／ml、57.65±41.65 pg／ml、9.85±8.17 pg／ml、76.72±25.44 pg／ml、492.77±191.46 pg／ml,HSP組中37例無(wú)腎損害,其血漿細(xì)胞因子IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-4、TGF-β1的水平分別16.98±7.21 pg／ml、62.13±44.32 pg／ml、13.02±7.97 pg／ml、68.95±23.51pg／ml、477.96±189.32 pg／m

9、l,兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。4、HSP組CD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+,CD4+／CD8+、CD4+CD25+測(cè)定結(jié)果分別為62.7±8.52％、30.61±6.93％、31.42±6.65％、1.02±0.37％、5.34±2.51％,對(duì)照組分別為65.04±6.50％、35.98±4.19％、30.72±16.5％、1.18±0.35％、7.85±1.97％,兩組比較CD3+、CD3+CD4+、CD4+

10、／CD8+、CD4+CD25+較對(duì)照組降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),而CD8+較對(duì)照組升高,兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。HSP組B細(xì)胞CD19+測(cè)定結(jié)果為23.16±7.37％,高于對(duì)照組B細(xì)胞CD19+18.91±3.53％,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。HSP組中有腎損害患兒T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+／CD8+、CD4+CD25+及B細(xì)胞CD19+檢測(cè)結(jié)果分別為6

11、4.83±8.25％、33.12±7.01％、31.71±7.03％、1.10±0.36％、4.28±1.92％、20.81±8.40％,HSP組中無(wú)腎損害患兒T淋巴細(xì)胞亞群及B細(xì)胞CD19+檢測(cè)結(jié)果分別為61.22±8.11％、30.75±4.43％、29.44±9.22％、1.15±0.41％、5.85±2.47％、25.58±5.84％,兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論:1、過(guò)敏性紫癜患兒急性期存在T淋

12、巴細(xì)胞亞群的功能紊亂及B淋巴細(xì)胞的增殖活化；2、過(guò)敏性紫癜患兒急性期存在Th1／Th2失衡,主要表現(xiàn)為T(mén)h2的優(yōu)勢(shì)活化,該失衡與其特異性的轉(zhuǎn)錄因子T-bet mRNA、GATA-3 mRNA表達(dá)異常有關(guān),本研究為闡明Th1／Th2失衡的分子機(jī)制之一提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)；3、過(guò)敏性紫癜患兒急性期存在CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)降低,其特異性的轉(zhuǎn)錄因子FoxP3 mRNA表達(dá)下調(diào),本研究結(jié)果表明調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的減少以及由此引發(fā)的免疫抑制效應(yīng)