小鼠肝藥酶P450晝夜節(jié)律變化及性別差異.pdf

1、第一部分小鼠肝藥酶Cyp1a表達(dá)的晝夜節(jié)律變化及毒理學(xué)意義
　　 目的:探究昆明種小鼠肝藥酶Cyp1a的晝夜節(jié)律、性別差異以及對(duì)肝毒物毒性變化的影響。
　　 方法:昆明小鼠在環(huán)境控制的SPF飼養(yǎng)室內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)兩周后，于06:00、10:00、14:00、18:00、22:00、02:00處死取肝臟，用real-time PCR方法檢測(cè)24h內(nèi)時(shí)鐘基因Rev-erbα、Per1、Per2和兩種肝藥酶基因Cyp1a1、Cyp

2、1a2及其調(diào)控核受體基因AhR的表達(dá);于06:00、18:00腹腔注射500 mg.kg-1對(duì)乙酰氨基酚，12h后斷頭取血檢測(cè)血清中ALT和AST。
　　 結(jié)果:肝藥酶基因Cyp1a1、Cyp1a2在14:00左右表達(dá)最高，在06:00左右表達(dá)最低，與時(shí)鐘基因Rev-erbα節(jié)律差異大致相符;其調(diào)節(jié)基因AhR在18:00左右表達(dá)最高，在06:00左右表達(dá)最低，與時(shí)鐘基因Per1、Per2節(jié)律差異大致相符?；駽yp1a1、Cyp

3、1a2、AhR表達(dá)峰谷差為4-7倍，且雌鼠的表達(dá)高于雄鼠。與此節(jié)律相對(duì)應(yīng)，經(jīng)Cyp1a代謝的對(duì)乙酰氨基酚引起的肝毒性在18:00給藥高于6:00給藥。
　　 結(jié)論:昆明種小鼠肝藥酶Cyp1a基因表達(dá)存在晝夜節(jié)律及性別差異，該差異可影響肝毒物如對(duì)乙酰氨基酚的代謝和毒性。
　　 第二部分小鼠肝藥酶Cyp2、3、4家族及其核受體晝夜節(jié)律變化及性別差異
　　 目的性別差異和晝夜節(jié)律是影響藥物代謝酶表達(dá)的重要因素。本實(shí)驗(yàn)旨

4、在研究小鼠肝藥酶Cyp2、3、4家族及其核受體晝夜節(jié)律中伴隨的性別差異。
　　 方法48只昆明小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一個(gè)星期后，于02:00、06:00、10:00、14:00、18:00、22:00處死取肝臟組織提取總RNA。采用real-time PCR和western-blot檢測(cè)和分析肝藥酶P450及其相關(guān)核受體的基因和蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果 CAR的mRNA和cyp2b10蛋白在雌性和黑暗期具有高表達(dá)。PXR表達(dá)高峰

5、在18:00，但其調(diào)節(jié)的cyp3a11和cyp3a25表達(dá)高峰位于10:00，且無(wú)性別差異存在。PPARα和其調(diào)節(jié)的cyp4a10、cyp4a14在雌性中表達(dá)較高，其高峰分別位于14:00,18:00。FXR、cyp7a1、cyp27a1的mRNA表達(dá)高峰同位于18:00.cyp7a1蛋白在光照期和雌性中高表達(dá)。Cyp7b1雄性比雌性表達(dá)高，而cyp2a4正好相反，兩者都顯示出明顯的晝夜差異。時(shí)鐘基因Cry1、Bmal1、Dbp的節(jié)律表

6、達(dá)高峰位于不同時(shí)間點(diǎn)。
　　 結(jié)論小鼠肝臟cyp基因及其相應(yīng)的核受體存在性別差異和晝夜節(jié)律。影響著外源性物質(zhì)和毒物的代謝的變化。
　　 第三部分二乙基亞硝胺誘導(dǎo)小鼠肝癌伴隨時(shí)鐘基因表達(dá)紊亂
　　 目的探討在二乙基亞硝胺誘導(dǎo)的小鼠肝癌情況下時(shí)鐘基因表達(dá)的變化。
　　 方法采用二乙基亞硝胺和CCl4來(lái)誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠肝癌，于16周后10:00處死小鼠取正常肝組織、癌旁組織和癌組織。提取總RNA并采用r

7、eal-time PCR方法來(lái)檢測(cè)腫瘤標(biāo)志基因AFP，時(shí)鐘基因Bmal1、Dbp和Rev-Erbá的表達(dá)。
　　 結(jié)果與正常組相比較，腫瘤標(biāo)志基因AFP在腫瘤組織中明顯上升;正常肝組織中Bmal1表達(dá)較高，而Dbp和Rev-Erbá表達(dá)較低，相比之下時(shí)鐘基因Bmal1在癌旁組織和癌組織中表達(dá)下降，降到正常組的1/3;時(shí)鐘基因Dbp和Rev-Erbá在癌旁組織和癌組織中表達(dá)則上升，達(dá)到正常組的2～4倍，癌旁組織與癌組織無(wú)明顯差異。