As-,2-O-,3-納米粒的制備和體外治療肝癌及其分子機制的實驗研究.pdf

1、[目的]:①研究砒霜(As2O3)納米粒的制備工藝及表征；②研究As2O3納米粒子體外對人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的增殖抑制和凋亡誘導(dǎo)作用，并與傳統(tǒng)的劑型亞砷酸(As2O3注射液)進(jìn)行比較；③研究As2O3納米粒體外誘導(dǎo)凋亡的分子機制。 [材料方法]:①采用溶膠-凝膠法制備As2O3納米粒，用透射電鏡(transmissionelectronmicroscope，TEM)、掃描電鏡(scanningelectronmicros

2、cope,SEM)、能譜儀(energydispersivespectrometer，EDS)、圖像分析系統(tǒng)(ComputercolormagicimageanalysissystemCMIAS)進(jìn)行表征及特性檢測。②采用MTT法研究As2O3納米粒子體外對人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的增殖抑制作用；光鏡和電鏡觀察As2O3納米粒處理細(xì)胞后的形態(tài)學(xué)改變，并與傳統(tǒng)的劑型亞砷酸(As2O3注射液)進(jìn)行比較；流式細(xì)胞儀測定As2O3納米粒子及

3、亞砷酸誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡率。③免疫組織化學(xué)法、RT-PCR方法檢測As2O3納米粒子及亞砷酸處理細(xì)胞后Bcl-2和Bax基因的表達(dá)改變。 [結(jié)果]:①自行研制的As2O3納米粒子近圓形或橢圓形，電子密度高，分散性好，直徑分別為80nm和40nm兩種。其經(jīng)能譜儀檢測證實為As2O3，圖像分析系統(tǒng)對As2O3納米粒子的粒徑進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)測試，結(jié)果示其平均粒徑為80nm±0.01和40nm±0.01；②體外細(xì)胞培養(yǎng)實驗發(fā)現(xiàn)，亞砷酸和As2O3

4、納米粒均可對人肝癌細(xì)胞產(chǎn)生明顯的生長抑制作用，并誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡。在相同的As2O3濃度及培養(yǎng)條件下，As2O3納米粒顯示山比亞砷酸有更為明顯的細(xì)胞毒作用，尤其在高濃度情況下(5、10μmol/L)更為明顯(P＜0.05)。流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示高濃度As2O3納米粒的誘導(dǎo)凋亡作用(14.62％、32.69％)明顯強于亞砷酸(5.89％、24.14％)。③免疫組織化學(xué)和RT-PCR結(jié)果顯示亞砷酸和As2O3納米粒子均對SMMC-7721肝癌細(xì)

5、胞的Bcl-2基因的表達(dá)有抑制作用，對Bax基因的表達(dá)有促進(jìn)作用(Bcl-2/Bax比值降低)。RT-PCR示在低濃度時(2μm/L)，兩者的抑制和促進(jìn)作用相近，但在高濃度時(10μm/L)，As2O3納米粒子的作用明顯強于亞砷酸。 [結(jié)論]:①采用溶膠-凝膠法可將As2O3制備成納米粒子；②體外細(xì)胞實驗證實As2O3納米粒子抗肝癌細(xì)胞的效應(yīng)強于亞砷酸溶液；③免疫組織化學(xué)法和RT-PCR實驗顯示As2O3納米粒較強的誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞