As-,2-O-,3-合并TPA誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:本課題采用不同濃度的As2O3聯(lián)合TPA作用于體外培養(yǎng)人白血病細(xì)胞系HL-60的方法，從形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)方面，分析不同濃度的As2O3以及聯(lián)合TPA對(duì)HL-60細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及凋亡作用特點(diǎn)，并探討其誘導(dǎo)分化及凋亡的機(jī)制。 對(duì)象與方法:1.HL-60細(xì)胞(目前認(rèn)為是M2型白血病細(xì)胞株)培養(yǎng)于含15％滅活胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，置于CO2培養(yǎng)箱內(nèi)(CO2濃度為5％，相對(duì)濕度為95％，溫度為37℃)。

2、　　2.在細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期取適量，離心，去除上清，用RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)制成密度為5～10×105個(gè)/ml。隨機(jī)分為八組，每組9ml。分別為：①對(duì)照組：(自身對(duì)照，條件同TPA組，只是不加TPA)；②TPA組：加入TPA(終濃度為1.6×10-8mol/L)；③As2O3組：細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后加入As2O3(終濃度分別為0.2×10-6mol/L、2.0×10-6mol/L、20×10-6mol/L)；④TPA+As2O3組：加入T

3、PA(終濃度為1.6×10-8mol/L)誘導(dǎo)24小時(shí)后加入不同濃度的As2O3(As2O3的終濃度為分別為0.2×10-6mol/L、2.0×10-6mol/L、20×10-6mol/L),常規(guī)培養(yǎng)?！　?.觀察指標(biāo)：①細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變：于培養(yǎng)24小時(shí)，48小時(shí)，72小時(shí)，在倒置顯微鏡下觀察活細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況；②活細(xì)胞臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)；③MTT比色法測(cè)定細(xì)胞增殖情況：培養(yǎng)72小時(shí)后每孔加入5g/LMTT20μl，用酶標(biāo)儀(λ490nm)測(cè)定每