As-,2-O-,3-誘導HeLa細胞凋亡的分子機制研究.pdf

1、目的:用As<,2>O<,3>誘導人宮頸癌HeLa細胞凋亡,檢測As<,2>O<,3>對HeLa細胞端粒酶活性及HPV18 E6基因的影響,探討As<,2>O<,3>誘導HeLa細胞凋亡的分子機制;了解維生素C是否能協(xié)同As<,2>O<,3>誘導HeLa細胞凋亡的作用,為臨床治療宮頸癌提供新思路.方法:采用不同濃度的As<,2>O<,3>作用于人宮頸癌HeLa細胞不同時間段后,用MTT法、光學顯微鏡觀察、電鏡、流式細胞儀等方法檢測As<

2、,2>O<,3>對HeLa細胞生長抑制作用和誘導細胞凋亡作用,用端粒酶重復片斷擴增-酶聯(lián)免疫法(TRAP-ELISA)測定細胞內端粒酶變化情況,用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法測定HPV18 E6致瘤基因的表達.采用維生素C和As<,2>O<,3>聯(lián)合處理HeLa細胞觀察凋亡情況,測定端粒酶活性的變化.結果:2μmol·L<'-1>As<,2>O<,3>處理HeLa細胞48h后,細胞生長受到抑制,出現(xiàn)較多凋亡細胞,并經電鏡證實

3、,隨著As<,2>O<,3>濃度增加和作用時間延長,這一作用明顯增強.流式細胞儀分析表明:2μmol·L<'-1>As<,2>O<,3>作用48h后,G1期前面出現(xiàn)明顯的亞二倍體峰(凋亡峰),隨著劑量增加,凋亡率增加.2μmol·L<'-1>As<,2>O<,3>作用48h后,端粒酶活性受抑,2μmol·L<'-1>As<,2>O<,3>作用48h后,HPV18 E6表達受抑制.維生素C和As<,2>O<,3>聯(lián)合處理較單一As<,2>

4、O<,3>處理HeLa細胞后,細胞凋亡率增加,端粒酶活性抑制更明顯.結論:1.2μmol·L<'-1>-10μmol·L<'-1>As<,2>O<,3>可抑制HeLa細胞增殖,誘導其凋亡.2.As<,2>O<,3>可抑制HeLa細胞端粒酶活性,抑制端粒酶活性為As<,2>O<,3>誘導HeLa細胞凋亡的機制之一,As<,2>O<,3>可下調HeLa細胞HPV18 E6的表達,E6表達與端粒酶活性之間存在相關性.3.維生素C通過協(xié)同As<