人胰島素樣生長(zhǎng)因子-1和RNA干擾多聚蛋白聚糖酶-1基因?qū)θ斯撬韪杉?xì)胞骨架的影響研究.pdf

1、背景：目前慢病毒介導(dǎo)aggrecanase-1shRNA及hIGF-1雙向作用于類風(fēng)濕患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的研究還處在初級(jí)階段。
　　目的：觀察在將aggrecanase-1shRNA、hIGF-1基因同時(shí)轉(zhuǎn)染到人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后，目的基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及細(xì)胞分化情況。
　　方法：體外培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并應(yīng)用攜帶aggrecanase-1shRNA、hIGF-1基因和綠色熒光蛋白的慢病毒載體轉(zhuǎn)染第3代人骨髓間充質(zhì)干細(xì)

2、胞，同時(shí)以空載體轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為陰性對(duì)照組。待病毒轉(zhuǎn)染率到最高時(shí)分別提取各組細(xì)胞的蛋白檢測(cè)從而得出目的基因表達(dá)量。并應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染成功后細(xì)胞的骨架及細(xì)胞形態(tài)。
　　結(jié)果與結(jié)論：成功于體外培養(yǎng)出人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，而且以慢病毒為載體成功的將目的基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)。熒光顯微鏡下可觀察到細(xì)胞發(fā)出綠色熒光，各組的平均轉(zhuǎn)染效率可達(dá)到88％。Western blot檢測(cè)結(jié)果及激光共聚焦顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)顯示,目的基因在人骨