乙型肝炎疫苗聯合B7-H1蛋白疫苗對HBV轉基因小鼠抗HBsAg免疫應答的影響.pdf

1、據世界衛(wèi)生組織報道，全球約20億人曾感染過乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV），其中3.5億人為慢性HBV感染者。乙型肝炎及其導致的失代償性肝硬化、重型肝炎和肝細胞癌等終末期肝病不僅危害全人類的健康，而且也是當前危害中國人民生命健康的嚴重的公共衛(wèi)生問題。雖然經過各國科學家的長期努力，已初步闡明HBV的持續(xù)復制和機體抗HBV免疫反應的低下是乙型肝炎慢性化的基本原因，并且研發(fā)了若干有一定療效的治療藥物和方法，但是距離治

2、愈和徹底戰(zhàn)勝乙肝肝炎仍有相當長的路要走，進一步深入研究和探索各種治療慢性乙型肝炎的新藥物和新方法，仍然是中國和全球科學家及醫(yī)務工作者面臨的嚴峻挑戰(zhàn)和當務之急。
　　程序性死亡因子1及其配體1（programmed death1,PD-1;programmed death1 ligant1,PD-L1）是近年發(fā)現的重要的免疫調節(jié)分子，也是當前乙型肝炎免疫發(fā)病機制研究的熱點。PD-1屬于免疫球蛋白超家族成員，是一種Ⅰ型跨膜糖蛋白，以單

3、體形式存在，可介導負性調節(jié)信號且在T、B淋巴細胞中都有表達。PD-L1又稱B7-H1（B7 homolog1）是Dong等人發(fā)現的第三個B7家族的成員，也屬于Ⅰ型跨膜蛋白，在肝臟的抗原提呈細胞和星形細胞上均有表達。
　　PD-1/B7-H1信號通路能夠負性調節(jié)T、B細胞參與的免疫反應，參與免疫耐受，使病毒特異性T細胞的免疫功能受到抑制，通常在病毒感染發(fā)生時PD-1及B7-H1的表達上調。PD-1/B7-H1信號通路是HBV逃避免疫

4、監(jiān)視、引發(fā)慢性HBV感染的重要通路，可能成為慢性HBV感染的有效治療靶位。有報道HBV轉基因小鼠（Tg鼠）處于對HBV的免疫耐受狀態(tài)，對各種HBV抗原和HBV感染均不產生細胞和體液免疫應答，以上特點與某些慢性HBV感染者類似。因此，本課題引進HBV-Tg小鼠模型，應用第四軍醫(yī)大學藥學系生物制藥學教研室制備的重組人B7-H1蛋白疫苗，擬通過主動免疫誘生HBV轉基因小鼠產生抗B7-H1的抗體，以阻斷PD-1/B7-H1信號通路和上調抗HBV

5、免疫應答、加速HBV的清除、減緩和阻止乙型肝炎慢性化，為探索慢性乙型肝炎的治療新方法提供理論依據。
　　本課題主要研究內容和結果如下：
　　1、用不同劑量的乙型肝炎疫苗和B7-H1蛋白疫苗分別于0周、2周、4周、8周共4次聯合免疫HBV轉基因小鼠，于1周、3周、5周、7周、9周、11周、13周眶后取血7次，分離血清凍存于-20℃。應用ELISA法檢測轉基因小鼠在不同時間點血清抗B7-H1抗體滴度。結果發(fā)現5周起血清中即能測到

6、 B7-H1抗體，且同一時間點各組之間的抗體滴度值并無明顯差異。
　　2、在免疫后第14周末處死小鼠取脾細胞，檢測不同的免疫方法對HBsAg特異性分泌IFN-γT細胞數量、對小鼠脾細胞產生HBsAg特異性Th1類細胞因子（IFN-γ及IL-2）及對小鼠淋巴細胞增殖的影響。顯示乙肝疫苗聯合 B7-H1蛋白免疫各組與相同劑量 HBsAg蛋白單獨免疫組相比，分泌IFN-γ的HBsAg特異性T細胞數量下降，IL-2均明顯減低（P＜0.05

7、），但 IFN-γ無明顯差異，脾淋巴細胞分泌 IFN-γ的水平各組間無明顯差異；MTT法測定的淋巴細胞增殖能力各組間也無明顯變化。
　　上述研究結果表明，B7-H1蛋白疫苗雖然可以誘導HBV轉基因小鼠產生明顯的抗B7-H1抗體應答，但不能增強抗HBsAg的免疫應答。較小劑量的HBsAg即可引起HBV轉基因小鼠TH1類細胞因子（IFN-γ及IL-2）的分泌以及淋巴細胞增殖。
　　本研究結果也提示，單純通過 B7-H1蛋白疫苗免