重組腺病毒介導(dǎo)多藥耐藥基因反義RNA逆轉(zhuǎn)人肝癌細(xì)胞株的MDR表型的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、四川大學(xué)博士學(xué)位論文重組腺病毒介導(dǎo)多藥耐藥基因反義RNA逆轉(zhuǎn)人肝癌細(xì)胞株的MDR表型的實(shí)驗(yàn)研究姓名：李波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：嚴(yán)律南20040506檢測(cè)腫瘤的體積變化和腫瘤抑制率。結(jié)果從人肝癌耐藥細(xì)胞株SMMC7721ADM提取的RNA進(jìn)行RTPCR得到的擴(kuò)增產(chǎn)物為609bp的片段，經(jīng)DNA測(cè)序證實(shí)為mdrl基因片段。成功地構(gòu)建了攜帶反義mdrl基因部分片段的重組腺病毒pAdEasyGFPASmdrl，重組腺病毒AdE

2、asyGFPASmdrl是2.5X109efuml。重組腺病毒對(duì)SMMC7721ADM細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖沒有明顯影響在體外感染腺病毒pAdEasyGFPASmdrl后，與感染空白病毒pAdEasyGFP和未處理的SMMC7721ADM細(xì)胞相t匕，SMMC7721ADM細(xì)胞恢復(fù)了對(duì)化療藥物的敏感性，其對(duì)ADM和DNR的ICS。分別為0.44vgml和0.20LgmlRF分別是88和66.6，較耐藥細(xì)胞SMMC7721ADM下降了40倍和11

3、3.33倍。感染腺病毒24h后mdrlmRNA和Pgp的表達(dá)呈下降趨勢(shì)，對(duì)DNR的蓄積增加感染120h后與SMMC7721ADM細(xì)胞相比，mdrlmRNA表達(dá)顯著下降(P0.01)和Pgp的表達(dá)明顯減弱(P0.01)DNR的胞內(nèi)濃度明顯增加(P0.05)。在裸鼠肝癌移植瘤模型中，三組的平均成瘤時(shí)間分別是19.7d.18.6d和20.2d成瘤率均為100%。給予ADM后，感染腺病毒AdEasyGFPASmdrl的移植瘤的體積增長(zhǎng)慢于感染空

4、白病毒組和未處理細(xì)胞組，相對(duì)空白病毒和未處理細(xì)胞組的腫瘤抑制率為44.14%和41.59%.結(jié)論利用腺病毒載體系統(tǒng)AdEasy，可以快速而簡(jiǎn)便獲得重組腺病毒。重組腺病毒介導(dǎo)的mdr1反義RNA無論在體內(nèi)和體外均可以較好封閉人肝癌細(xì)胞株SMMC7721ADM的mdrl基因的表達(dá)，恢復(fù)對(duì)化療藥物的敏感性，可以部分逆轉(zhuǎn)MDR。為以mdrl為靶基因進(jìn)一步進(jìn)行肝癌基因治療的研究奠定了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞多藥耐藥多藥耐藥基因重組腺病毒反義RNA人