苦參素逆轉(zhuǎn)人肝癌細(xì)胞株HepG2-ADM多藥耐藥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討苦參素(Oxymatrine，OM)體外逆轉(zhuǎn)人肝癌耐藥細(xì)胞株HepG2/ADM多藥耐藥的作用及其機(jī)制。
　　方法:體外培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株HepG2、人肝癌耐藥細(xì)胞株HepG2/ADM;四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)苦參素對(duì)HepG2及HepG2/ADM細(xì)胞株的抑制作用;MTT比色法檢測(cè)耐藥細(xì)胞株HepG2/ADM的多藥耐藥性及苦參素干預(yù)前后耐藥細(xì)胞株藥敏性的變化,觀察藥物逆轉(zhuǎn)效果;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)苦參素對(duì)HepG2/AD

2、M細(xì)胞細(xì)胞凋亡的影響;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)苦參素作用前后HepG2/ADM細(xì)胞內(nèi)ABCB1基因表達(dá)的變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)苦參素作用前后HepG2/ADM細(xì)胞細(xì)胞膜表面P糖蛋白(P-gp)表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:1、當(dāng)苦參素濃度為0.5mg/mL時(shí)對(duì)HepG2及HepG2/ADM兩種細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制率均＜10％，無(wú)明顯毒性作用。2、阿霉素(Adriamycin，ADM)對(duì)HepG2和HepG2/ADM細(xì)胞株的IC50分別為0.4

3、2mg/L、11.56mg/L，耐藥指數(shù)為27.52，苦參素作用后ADM對(duì)HepG2/ADM細(xì)胞株的IC50降低為3.14mg/L，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)約為3.68倍;順鉑(Cisplatin，CDDP)對(duì)HepG2和HepG2/ADM細(xì)胞株的IC50分別為3.29mg/L、18.08mg/L，耐藥指數(shù)為5.50，苦參素作用后CDDP對(duì)HepG2/ADM細(xì)胞株的IC50降低為6.41mg/L，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)約為2.82倍;5-氟尿嘧啶（5-Fluorou

4、racil，5-FU）對(duì)HepG2和HepG2/ADM細(xì)胞株的IC50分別為7.94mg/L、34.83mg/L，耐藥指數(shù)為4.39，苦參素作用后5-FU對(duì)HepG2/ADM細(xì)胞株的IC50降低為17.17mg/L，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)約為2.03倍。3、0.5mg/mL濃度的苦參素作用HepG2/ADM細(xì)胞24、48、72h后，各組細(xì)胞早期細(xì)胞凋亡率均隨苦參素作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，其早期細(xì)胞凋亡率分別為1.77％±0.25％vs0.50％±0.1

5、0％，2.53％±0.15％vs0.63％±0.06％，3.83％±0.42％vs0.66％±0.06％，各實(shí)驗(yàn)組與各陰性對(duì)照組相比較，實(shí)驗(yàn)組各組間相比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。4、0.5mg/mL濃度的苦參素作用HepG2/ADM耐藥細(xì)胞株耐藥48h后，與陰性對(duì)照組相比較，其耐藥相關(guān)基因ABCB1的表達(dá)下調(diào)，其比率為0.49倍。5、0.5mg/mL濃度的苦參素作用HepG2/ADM耐藥細(xì)胞株耐藥48h后，與陰性對(duì)照組相比

6、較，其細(xì)胞膜表面P-gp的表達(dá)下調(diào)，但仍高于HepG2細(xì)胞組(21.50％±1.08％vs40.83％±0.35％,21.50％±1.08％vs10.36％±0.60％,P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、苦參素在體外可以抑制HepG2及HepG2/ADM細(xì)胞株的生長(zhǎng)。
　　2、苦參素在體外能夠部分逆轉(zhuǎn)人肝癌耐藥細(xì)胞株HepG2/ADM的多藥耐藥性。
　　3、苦參素逆轉(zhuǎn)人肝癌耐藥細(xì)胞株HepG2/ADM的多藥耐