基于核酸適體的微流控芯片腫瘤細(xì)胞富集與檢測平臺的建立.pdf

1、本論文主要是針對急性早幼粒細(xì)胞白血病腫瘤細(xì)胞建立微流控芯片富集和分子生物學(xué)檢測技術(shù)平臺。整本論文主要可分為兩個部分。其中第一部分主要針對急性早幼粒細(xì)胞白血病的腫瘤標(biāo)志物建立實時熒光PCR分子生物學(xué)檢測體系。第二部分主要針對急性早幼粒細(xì)胞白血病腫瘤細(xì)胞建立基于核酸適體的微流控芯片富集與檢測平臺。
　　第一章為緒論，通過閱讀大量的文獻和資料，綜述了本論文開展的研究中所涉及的主要領(lǐng)域。包括:白血病的介紹和其檢測技術(shù)的發(fā)展、富集和檢測循環(huán)

2、腫瘤細(xì)胞的主要技術(shù)、核酸適體的簡要介紹及其發(fā)展應(yīng)用。
　　第二章主要針對急性早幼粒細(xì)胞白血病的腫瘤標(biāo)志物建立實時熒光PCR分子生物學(xué)檢測體系。在本章中主要針對普遍存在于此類白血病細(xì)胞系中的PML-RARA融合基因建立實時PCR檢測體系。首先用構(gòu)建的PML-RARA融合基因L型融合形式的陽性質(zhì)粒篩選出了最優(yōu)的引物和探針組合，然后通過優(yōu)化實時PCR體系的各種成分確定了最優(yōu)的實時PCR體系。最后用陽性質(zhì)粒、NB4細(xì)胞系cDNA（含有PM

3、L-RARA融合基因）及U266細(xì)胞系cDNA（陰性對照）作為模板，比較了普通引物（不加尾）和加尾引物體系的靈敏度和特異性，最終確定了最優(yōu)的實時PCR檢測體系。結(jié)果表明實驗中建立的最優(yōu)實時PCR體系不僅具有很高的靈敏度（可達到10拷貝），而且具有良好的特異性。
　　第三章主要針對急性早幼粒細(xì)胞白血病腫瘤細(xì)胞建立基于核酸適體的微流控芯片富集平臺，并用實時PCR技術(shù)對富集細(xì)胞進行檢測。在本章中，首先用流式細(xì)胞術(shù)和芯片上的細(xì)胞捕獲效果篩

4、選出了一條與NB4細(xì)胞系具有高親和力和良好特異性的核酸適體。然后根據(jù)實驗室現(xiàn)有條件優(yōu)化了細(xì)胞捕獲實驗中的幾個參數(shù)，使細(xì)胞捕獲效率得到顯著提高。最后對人工制備的細(xì)胞混合樣品（摻雜不同數(shù)量的NB4細(xì)胞和對照U266細(xì)胞）進行捕獲，并將細(xì)胞從芯片通道中釋放下來進行核酸水平的檢測。結(jié)果表明，本實驗中建立的微流控芯片平臺對NB4細(xì)胞的捕獲效率可達到80％左右。在DNA水平的檢測中，含有101個NB4細(xì)胞的樣品在實時PCR中可產(chǎn)生較強信號，表明本實