基于核酸適體的微流控芯片腫瘤細(xì)胞富集與檢測(cè)平臺(tái)的建立.pdf

1、本論文主要是針對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病腫瘤細(xì)胞建立微流控芯片富集和分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)。整本論文主要可分為兩個(gè)部分。其中第一部分主要針對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病的腫瘤標(biāo)志物建立實(shí)時(shí)熒光PCR分子生物學(xué)檢測(cè)體系。第二部分主要針對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病腫瘤細(xì)胞建立基于核酸適體的微流控芯片富集與檢測(cè)平臺(tái)。
　　第一章為緒論，通過閱讀大量的文獻(xiàn)和資料，綜述了本論文開展的研究中所涉及的主要領(lǐng)域。包括:白血病的介紹和其檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展、富集和檢測(cè)循環(huán)

2、腫瘤細(xì)胞的主要技術(shù)、核酸適體的簡要介紹及其發(fā)展應(yīng)用。
　　第二章主要針對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病的腫瘤標(biāo)志物建立實(shí)時(shí)熒光PCR分子生物學(xué)檢測(cè)體系。在本章中主要針對(duì)普遍存在于此類白血病細(xì)胞系中的PML-RARA融合基因建立實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)體系。首先用構(gòu)建的PML-RARA融合基因L型融合形式的陽性質(zhì)粒篩選出了最優(yōu)的引物和探針組合，然后通過優(yōu)化實(shí)時(shí)PCR體系的各種成分確定了最優(yōu)的實(shí)時(shí)PCR體系。最后用陽性質(zhì)粒、NB4細(xì)胞系cDNA（含有PM

3、L-RARA融合基因）及U266細(xì)胞系cDNA（陰性對(duì)照）作為模板，比較了普通引物（不加尾）和加尾引物體系的靈敏度和特異性，最終確定了最優(yōu)的實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)體系。結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)中建立的最優(yōu)實(shí)時(shí)PCR體系不僅具有很高的靈敏度（可達(dá)到10拷貝），而且具有良好的特異性。
　　第三章主要針對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病腫瘤細(xì)胞建立基于核酸適體的微流控芯片富集平臺(tái)，并用實(shí)時(shí)PCR技術(shù)對(duì)富集細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。在本章中，首先用流式細(xì)胞術(shù)和芯片上的細(xì)胞捕獲效果篩

4、選出了一條與NB4細(xì)胞系具有高親和力和良好特異性的核酸適體。然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有條件優(yōu)化了細(xì)胞捕獲實(shí)驗(yàn)中的幾個(gè)參數(shù)，使細(xì)胞捕獲效率得到顯著提高。最后對(duì)人工制備的細(xì)胞混合樣品（摻雜不同數(shù)量的NB4細(xì)胞和對(duì)照U266細(xì)胞）進(jìn)行捕獲，并將細(xì)胞從芯片通道中釋放下來進(jìn)行核酸水平的檢測(cè)。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)中建立的微流控芯片平臺(tái)對(duì)NB4細(xì)胞的捕獲效率可達(dá)到80％左右。在DNA水平的檢測(cè)中，含有101個(gè)NB4細(xì)胞的樣品在實(shí)時(shí)PCR中可產(chǎn)生較強(qiáng)信號(hào)，表明本實(shí)