核酸適體用于腫瘤細(xì)胞的檢測與富集研究.pdf

1、探索腫瘤細(xì)胞檢測新方法對于實(shí)現(xiàn)癌癥的早期診斷和預(yù)防具有極其重要的意義。傳統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞檢測方法主要依靠形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行判定,存在敏感性低,易產(chǎn)生假陽性信號等局限性。核酸適體作為一類新型分子探針,既可作為識別探針實(shí)現(xiàn)對靶腫瘤細(xì)胞的特異性結(jié)合,亦可利用其酶催化活性構(gòu)建信號探針,且由于其親和力高、特異性好、易篩選、易修飾、易儲存等優(yōu)點(diǎn),在腫瘤細(xì)胞的檢測和富集中有著廣泛的應(yīng)用前景。本文以人急性淋巴白血病CCRF-CEM細(xì)胞及人宮頸癌Hela細(xì)胞為檢

2、測對象,將核酸適體探針應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞檢測和富集中,發(fā)展了對腫瘤細(xì)胞檢測和富集的新方法。具體如下:
　　 1.基于核酸適體G四聚體-葉酸復(fù)合物的腫瘤細(xì)胞檢測研究選擇具有酶催化作用的核酸適體G四聚體-Hemin復(fù)合體作為信號發(fā)生單元,通過氨基-羧基交聯(lián)將G四聚體與對葉酸受體高表達(dá)腫瘤細(xì)胞具有靶向識別作用的葉酸分子共價連接,制備了G四聚體-葉酸復(fù)合物。結(jié)合G四聚體-Hemin復(fù)合體在雙氧水存在的情況下能催化ABTS氧化顯色作用和葉酸分

3、子對表達(dá)葉酸受體的腫瘤細(xì)胞的靶向識別功能,通過酶標(biāo)儀檢測酶催化產(chǎn)物在414nm處的吸收值,實(shí)現(xiàn)了對葉酸受體高表達(dá)的Hela細(xì)胞的特異性定量檢測,檢測限達(dá)到了每毫升103個細(xì)胞,有望成為一種廣譜性檢測葉酸受體高表達(dá)腫瘤細(xì)胞的方法。
　　 2.基于核酸適體和信號DNA功能化金納米顆粒的腫瘤細(xì)胞檢測研究選擇對CCRF-CEM細(xì)胞具有靶向識別作用的核酸適體sgc8c作為識別單元,利用信號DNA分子作為信號發(fā)生單元,結(jié)合高比表面積的金納米

4、顆粒作為載體以提高核酸探針修飾豐度,開展了基于核酸適體和信號DNA功能化金納米顆粒的腫瘤細(xì)胞檢測研究。在該研究中,首先通過巰基將sgc8c交聯(lián)到金納米顆粒上,再將信號DNA雜交在sgc8c的延伸序列上,成功制備了基于核酸適體和信號DNA功能化金納米顆粒的腫瘤細(xì)胞檢測探針,在靶向識別結(jié)合目標(biāo)細(xì)胞后釋放出信號DNA,再利用分子信標(biāo)對信號DNA進(jìn)行檢測,實(shí)現(xiàn)了對CEM細(xì)胞的特異性檢測。在沒有結(jié)合信號DNA擴(kuò)增檢測技術(shù)的情況下,每毫升104個目

5、標(biāo)細(xì)胞即可產(chǎn)生明顯的檢測信號。
　　 3.基于核酸適體靶向識別功能的腫瘤細(xì)胞磁分離和富集研究選擇對CCRF-CEM細(xì)胞具有靶向識別作用的核酸適體sgc8c為識別單元,通過采用生物素-鏈霉親和素交聯(lián)方法,將sgc8c修飾在磁性微米磁球上,成功制備了能特異性結(jié)合CEM細(xì)胞的核酸適體功能化磁珠。該功能化磁珠在對目標(biāo)細(xì)胞的捕獲后,利用簡單的磁分離手段即可實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)細(xì)胞的特異性分離和富集,捕獲檢測限達(dá)到了每毫升102個細(xì)胞,分離純度超過了