姜黃素對大鼠腦缺血再灌注損傷海馬神經(jīng)元NMDA受體重塑的影響.pdf

1、目的：觀察不同濃度姜黃素對大鼠腦缺血再灌注后海馬CA1區(qū)、CA3/DG區(qū)不同時間點細(xì)胞形態(tài)學(xué)、N-甲基-D-天門冬氨酸受體(NMDA-R)亞單位NR2A、NR2B的表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響. 方法：雄性SD大鼠225只,隨機分成五組:假手術(shù)組(S組)、缺血再灌注組(IR組)、姜黃素30 mg/kg組(Cur30組)、姜黃素100 mg/kg組(Cur100組)及姜黃素300 mg/kg組(Cur300組).S組僅燒灼雙側(cè)椎動脈,游離

2、雙側(cè)頸總動脈但不阻斷;其余四組在燒灼雙側(cè)椎動脈、游離雙側(cè)頸總動脈后24小時,阻斷雙側(cè)頸總動脈15分鐘,造成四動脈阻塞全腦缺血模型,四組大鼠分別在缺血前1小時腹腔注射不同劑量姜黃素或等容積溶媒;除S組外,余四組大鼠分別在再灌注后2h、6h、1d、3d、7d處死;上述5組再分為兩個亞組(各時間點n=6):①多聚甲醛灌注固定大腦組織后,通過HE染色觀察各時間點海馬細(xì)胞形態(tài)改變、免疫組化觀察NR2A、NR2B的表達(dá)及DNA斷端末端標(biāo)記(TUNE

3、L)法標(biāo)記凋亡陽性細(xì)胞;②各時間點(n=3)大鼠急性斷頭處死,迅速冰上取海馬組織液氮低溫冰凍保存,裂解組織,提取目的蛋白,用免疫蛋白印跡法(Western blotting)對NR2A、NR2B進(jìn)行半定量分析. 結(jié)果：1、形態(tài)學(xué)變化:S組海馬各區(qū)錐體細(xì)胞排列整齊,邊界清楚,核膜邊界清晰,核仁深染、清晰.IR組細(xì)胞輪廓消失,80﹪以上細(xì)胞出現(xiàn)胞漿固縮,核固縮、碎裂.各Cur組70﹪以上的細(xì)胞邊界尚清,核形狀尚規(guī)則,核邊界尚清,20

4、﹪左右細(xì)胞出現(xiàn)核染色變深,胞漿部分消失等變性的表現(xiàn). 2、NR2A、NR2B表達(dá)的變化: A、免疫組化:各實驗組海馬CA1區(qū)、CA3/DG區(qū)NR2A蛋白表達(dá)規(guī)律相似,再灌注后開始下降,至1d達(dá)最低值,后逐漸升高至7d達(dá)表達(dá)高峰,但組內(nèi)各時間點表達(dá)水平無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05).Cur100組、Cur300組再灌注各點CA1區(qū)、CA3/DG區(qū)NR2A的表達(dá)水平均明顯高于IR組(P<0.05),且表達(dá)水平Cur100組>C

5、ur300組>Cur30組>S組>IR組. 各實驗組CA1、CA3/DG區(qū)NR2B蛋白表達(dá)規(guī)律同NR2A的變化,和再灌注2h相比,1d表達(dá)最低,后開始升高,至7d出現(xiàn)表達(dá)高峰(表達(dá)水平明顯高于2h、1d點,P<0.05);IR組CA1、CA3/DG區(qū)在7d NR2B表達(dá)高于S組及Cur100組(P<0.05). B、免疫蛋白印跡:海馬組織NR2A蛋白表達(dá)各實驗組表達(dá)規(guī)律一致,和再灌注2h相比,6h表達(dá)增加,1d達(dá)最低值,

6、后緩慢升高.Cur100組、Cur300組、Cur30組及S組再灌注各點NR2A的表達(dá)水平均明顯高于IR組(P<0.05),且Cur100組>Cur300組>Cur30組>S組. NR2B蛋白表達(dá)各實驗組表達(dá)規(guī)律相似,再灌注6h升高,1d表達(dá)達(dá)最低值,后開始升高,直至7d達(dá)高峰(表達(dá)水平顯著高于1d點,P<0.05),IR組在2h海馬NR2B表達(dá)高于S組及Curl00組(P<0.05). 3、凋亡細(xì)胞計數(shù):各實驗組凋亡細(xì)

7、胞主要集中在CA1區(qū),再灌注后2h出現(xiàn)少量凋亡細(xì)胞,后逐漸增加,3d達(dá)到高峰后減少,至7d仍有少量凋亡細(xì)胞存在,IR組各時間點凋亡細(xì)胞數(shù)明顯高于S組及Curl00組(P<0.05),Cur300組各時間點凋亡細(xì)胞數(shù)高于Cur100組(P<0.05). 結(jié)論：姜黃素減少缺血性神經(jīng)元凋亡的發(fā)生可能與增強缺血再灌注大鼠海馬CA1區(qū)、CA3/DG區(qū)NR2A蛋白的表達(dá)、降低CA1/CA3/DG區(qū)NR2B蛋白表達(dá),增加NMDA-R可塑性有關(guān)