

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、背景與目的:
胞內鈣信號與很多生理過程密切相關。胰腺腺泡細胞鈣振蕩是胞內鈣信號的一種典型表現(xiàn)形式,為胞內鈣信號研究的常用模型,與胰液的分泌和胰腺炎的發(fā)病機制有密切關系。本研究根據(jù)課題組的現(xiàn)有條件,參考有關文獻,在合作研究組(美國Barrow神經(jīng)學研究所吳杰教授研究組)的幫助下,利用激光共聚焦顯微鏡(laser confocal microscope)和微量灌流給藥系統(tǒng),成功建立了乙酰膽堿(acetylcholine,Ach)誘
2、發(fā)的胰腺腺泡細胞鈣振蕩(calcium oscillations in pancreatic acinar cells)的成像研究方法。以此為基礎,本研究進一步探討了Ach誘發(fā)的胰腺腺泡細胞鈣振蕩的信號轉導特點、去敏感化現(xiàn)象和劑量效應,另外也觀察了咖啡因(caffeine,Caf)對胰腺腺泡細胞鈣振蕩的影響,以更深入系統(tǒng)地了解鈣振蕩的特征和相關機制。
材料與方法:
選用3-4周的成年昆明小鼠,雌雄不限;麻醉處死后,打
3、開腹腔,取出胰臟;用膠原酶消化7-8分鐘,取上清,機械吹打,離心2次,去上清,加適量標準液成胰腺腺泡細胞液;用移液槍取適量腺泡細胞液于培養(yǎng)皿中,fluo4-AM染色,Ach等藥物通過微量灌流系統(tǒng)按一定的時間次序作用于細胞上,利用激光共聚焦顯微鏡實時記錄此過程中的胞內鈣信號變化。實驗所獲得的圖像數(shù)據(jù)經(jīng)綜合使用多種軟件處理后,可獲得各個有效細胞的平均鈣釋放量、鈣振蕩頻率、鈣振蕩延時等參數(shù);最后對所得參數(shù)分組進行統(tǒng)計分析,以明確鈣振蕩的基本特
4、點。
結果:與結論:
1.在我們的實驗系統(tǒng)中,Ach(400nM)可較穩(wěn)定地引起胰腺腺泡細胞產(chǎn)生鈣振蕩:平均鈣釋放量為1.41±0.02(F/F0),鈣振蕩頻率為0.053±0.001Hz,n=99。該反應可被阿托品(1μM)完全阻斷。此結果表明我們已成功建成胰腺腺泡細胞鈣振蕩的成像研究方法,而且我們觀察到的鈣振蕩是通過M受體起作用的。
2.乙酰膽堿(Ach)的去敏感化分析:對于同一細胞,先加入一定濃度的A
5、ch(400nM)可引起一定幅度和頻率的鈣振蕩,間隔一定時間后,再加入相同濃度的Ach,可發(fā)現(xiàn)鈣振蕩幅度和頻率均有所降低:后一反應的平均鈣釋放量約為前面反應的91%±1%,鈣振蕩頻率為95%±1%,n=19。
3.Ach的劑量效應:在一定濃度范圍內(50nM~1600nM),鈣振蕩從無到有,平均鈣釋放量從弱到強,鈣振蕩頻率從低到高(當濃度足夠高如1600nM時,胞內鈣信號維持在一個較高水平而不再振蕩),呈現(xiàn)明顯的劑量效應。其中
6、,Ach(400nM)可較穩(wěn)定地誘發(fā)出典型的鈣振蕩。
4.咖啡因(caffeine)的影響:我們測試了多個濃度Caf的效應,發(fā)現(xiàn)在測試過的175個細胞中,有23個細胞(占13.1%)在加1mM的Caf后鈣振蕩完全消失,另外152個細胞的鈣振蕩減弱:平均鈣振蕩幅度減小,頻率降低。而在有鈣振蕩的例數(shù)中,Caf(n=152)可使胰腺腺泡細胞的平均鈣釋放量減少約1.6%,鈣振蕩頻率減少約2.7%。發(fā)現(xiàn)在測試過的91個細胞中,有25個細
7、胞(占27.5%)在加5mM的Caf后鈣振蕩完全消失,另外66個細胞的鈣振蕩減弱:平均鈣振蕩幅度減小,頻率降低。而在有鈣振蕩的例數(shù)中,Caf(n=66)可使胰腺腺泡細胞的平均鈣釋放量減少約3.7%,鈣振蕩頻率減少約3.6%。可見一定濃度的Caf可明顯減弱胰腺腺泡細胞鈣振蕩。而加入10mM和20mMCaf后鈣振蕩完全消失。
以上結果表明:借助激光共聚焦顯微鏡可直觀實時穩(wěn)定地觀察到Ach所誘發(fā)的胰腺腺泡細胞鈣振蕩,該鈣振蕩是通過M
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 小鼠胰腺腺泡細胞鈣振蕩研究:M受體去敏感化的時間依賴特點及2-APB和激光強度對鈣振蕩的影響.pdf
- 胰腺腺泡細胞鈣振蕩及其與急性胰腺炎動物模型的關系初探.pdf
- 鈣振蕩模型的復雜動態(tài).pdf
- Houart-Dupont鈣振蕩模型復雜動態(tài)分析.pdf
- 54990.小鼠卵細胞孤雌激活引發(fā)鈣振蕩的研究
- 2型糖尿病鼠胰腺B細胞SERCA的變化對鈣振蕩影響的建模研究.pdf
- 鈣振蕩頻率調節(jié)組胺誘導轉錄因子激活的機制研究.pdf
- 細胞內鈣振蕩和鈣波的生成、演化及其生理響應.pdf
- 19800.一個五變量鈣振蕩模型中的分支分析
- 腎小球系膜細胞內鈣振蕩的產(chǎn)生及其調節(jié)細胞收縮的機制研究.pdf
- 鈣敏感受體與鈣振蕩的維持及其調控的轉錄激活.pdf
- 高膽固醇血癥兔Oddi括約肌細胞鈣振蕩與SOD關系.pdf
- 不規(guī)則鈣振蕩通過累積波寬和振幅調節(jié)轉錄和基因表達.pdf
- 咖啡因誘導的鯽魚視網(wǎng)膜水平細胞胞內鈣振蕩及鈣庫操縱的鈣內流的貢獻.pdf
- SOCs激動劑-抑制劑對正常-缺血再灌注損傷大鼠肝細胞鈣振蕩的影響.pdf
- 過氧化氫與放射線對氣道上皮細胞、肺泡巨噬細胞鈣振蕩的影響研究.pdf
- 激光共聚焦掃描顯微成像系統(tǒng)及其信息分析的研究.pdf
- 異氟烷對發(fā)育期海馬神經(jīng)元鈣振蕩及軸突生長分化的影響.pdf
- 腺苷對海馬神經(jīng)元鈣振蕩和高電壓激活性鈣通道電流的作用研究.pdf
- 基于光纖束的共聚焦熒光內窺成像研究.pdf
評論
0/150
提交評論