腺苷對(duì)海馬神經(jīng)元鈣振蕩和高電壓激活性鈣通道電流的作用研究.pdf

1、目的:
　　 在細(xì)胞水平研究腺苷（Adenosine,Ade）對(duì)原代培養(yǎng)的SD大鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)鈣振蕩和細(xì)胞膜上高電壓激活性鈣通道電流(high voltage-activated calcium channel current,IHVA)的具體影響，并探討其可能的作用機(jī)制，從而為腺苷的抗癲癇效應(yīng)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 本實(shí)驗(yàn)以SD大鼠新生24h內(nèi)的乳鼠作為取材對(duì)象，以胰酶消化加巴氏管機(jī)械吹打的方法，經(jīng)

2、條件培養(yǎng)基純化建立原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元的研究模型。選取7-9天的細(xì)胞，應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗聯(lián)合激光掃描共聚焦顯微鏡結(jié)合Fluo-3/AM標(biāo)記技術(shù)，利用細(xì)胞外給予Ade的方法，檢測(cè)Ade干預(yù)前后鈣離子振蕩和高電壓激活鈣通道電流的變化這兩個(gè)指標(biāo)。
　　 結(jié)果：
　　 (1)原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠的海馬神經(jīng)元在7-9天發(fā)育基本成熟，應(yīng)用激光共聚焦鈣成像技術(shù)可以觀察到神經(jīng)元內(nèi)自發(fā)同步的鈣振蕩。以細(xì)胞外灌流方式給予Ade后，激光掃描共聚

3、焦顯微鏡發(fā)現(xiàn):Ade能抑制成熟海馬神經(jīng)元自發(fā)同步鈣振蕩的頻率和幅度：使其頻率從加藥前的(1.2±0.2)/min(0.02±0.003HZ)減少到(0.3±0.05)/min(0.005±0.001HZ)，幅度從加藥前的(1.87±0.17)下降到(1.0±0.07)，且這種作用對(duì)于Ade的劑量水平有一定的依賴性。用高鉀作為去極化刺激模擬癲癇狀電活動(dòng)時(shí)，鈣震蕩的頻率加快，幅度增大，而Ade對(duì)高鉀誘發(fā)鈣振蕩的頻率和幅度表現(xiàn)出了顯著抑制作用

4、。(2)原代培養(yǎng)的SD大鼠海馬神經(jīng)元采用膜片鉗技術(shù)在預(yù)設(shè)的刺激程序下可以記錄到IHVA，其為一組緩慢失活的內(nèi)向電流，可以被0.2mmol/L的CdCl2特異性阻斷。以細(xì)胞外干預(yù)的方式加入Ade后，膜片鉗觀察到：Ade為0.1、1、10、50umol/L時(shí)可使IHVA的幅度呈濃度依賴性的分別被抑制（5.2±2.3)％(n=6,P>0.05)，（8.1±1.9)％(n=6,P>0.05)，（28.4±2.8）％（n=6，p<0.05）,(4