死亡受體結(jié)構(gòu)域蛋白DAXX在卵巢表面上皮細(xì)胞和卵巢癌細(xì)胞中作用研究.pdf

1、卵巢癌是女性常見的惡性腫瘤，其致死率在所有婦科癌癥中居于第五位。成年女性的卵巢表面覆蓋有一層扁平的卵巢上皮細(xì)胞(mouseovarian surface epithelium，mOSE)。卵巢表面上皮細(xì)胞具有分泌激素和運輸?shù)裙δ堋Ｔ谂怕训倪^程中，女性卵巢表面出現(xiàn)周期性的破裂，mOSE細(xì)胞通過自我的復(fù)制可以修復(fù)這種周期性的損傷，在這個過程中mOSE細(xì)胞基因組的完整就顯得尤為重要。有研究表明，在羊排卵時，卵巢破裂處的mOSE細(xì)胞會發(fā)生DNA

2、損傷。除此之外，化學(xué)試劑methoxychlor也可以導(dǎo)致mOSE細(xì)胞氧壓力增強和DNA損傷。Valko等人也報道在大多數(shù)腫瘤中都有DNA損傷發(fā)生，這說明早期基因組異常與惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。
　　卵巢癌治療以化療為主，臨床上常用的卵巢癌化療藥物大多數(shù)可以造成腫瘤細(xì)胞的DNA損傷，如順鉑、博來霉素、VP-16和阿霉素，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的凋亡。卵巢癌患者對化療藥物的耐藥性是卵巢癌治療的關(guān)鍵問題。原癌蛋白的異常表達（如FAS，cas

3、pases，和p53等）及凋亡相關(guān)蛋白的失活(如AKT，F(xiàn)LIP)都可以引起腫瘤細(xì)胞的耐藥。
　　DAXX作為原癌蛋白與死亡域相關(guān)蛋白CD95受體相結(jié)合。通過激活c-Jun NH2-末端激酶增強CD95介導(dǎo)的生長因子β依賴性凋亡。有文獻報道，RNA干擾沉默Daxx可增加細(xì)胞凋亡，并且在小鼠中敲除Daxx基因可導(dǎo)致小鼠胚胎致死。這些都說明DAXX具有抗凋亡的作用。除了在凋亡和抗凋亡中的作用外，DAXX還可以與多種蛋白結(jié)合發(fā)揮轉(zhuǎn)錄沉默

4、作用，如組蛋白去乙酰化酶HDAC1，HDAC2，DNA甲基化酶DNMT1，同時DAXX也可作為轉(zhuǎn)錄抑制因子抑制C/EBPβ，c-Met, Pax3，Ets(l)，p53， p73， p63，糖皮質(zhì)激素受體，雄激素受體和SMAD4的表達。
　　DAXX的轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能與它的核定位密切相關(guān)。DAXX與SUMO修飾的PML結(jié)合并共定位在亞細(xì)胞核結(jié)構(gòu)，即PML癌基因結(jié)構(gòu)域PODs。早幼粒細(xì)胞白血病蛋白PML核體結(jié)構(gòu)(PML-NBs)存在于所

5、有的哺乳細(xì)胞中，是細(xì)胞核內(nèi)較大的核結(jié)構(gòu)域。PML與細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控和腫瘤抑制都有密切聯(lián)系。有研究表明一些凋亡的調(diào)控因子定位在PML-NBs區(qū)域，在PML缺失的老鼠中出現(xiàn)凋亡異常的現(xiàn)象。DAXX和PML在卵巢表面上皮細(xì)胞和卵巢癌細(xì)胞中的作用至今不清楚，本研究主要解決以下幾個問題:
　　第一部分，我們成功的構(gòu)建了過表達Daxx和敲除Daxx的mOSE細(xì)胞系，我們發(fā)現(xiàn)Daxx敲除可增加mOSE細(xì)胞依賴p53/p21途徑發(fā)生衰老，同時和

6、PML共同參與mOSE細(xì)胞DNA損傷。
　　第二部分，我們發(fā)現(xiàn)DAXX在人卵巢上皮細(xì)胞癌中高表達，但是在人顆粒細(xì)胞癌中低表達。在體外培養(yǎng)的卵巢癌細(xì)胞中，DAXX和PML相互作用共定位于PML-NBs區(qū)域。我們對DAXX在卵巢癌細(xì)胞中增殖、遷移及化療抵抗進行研究。在卵巢癌細(xì)胞中過表達Daxx可以促進細(xì)胞增殖、克隆形成和轉(zhuǎn)移，而通過RNA干擾使Daxx缺失后可以抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖、克隆形成和轉(zhuǎn)移能力。裸鼠的體內(nèi)實驗表明，給裸鼠注射D