銅綠假單胞菌耐藥性臨床與基礎(chǔ)的初步研究.pdf

1、目的：
　　銅綠假單孢菌(Pseudomonas aeruginosa, PA)感染在早產(chǎn)兒中的發(fā)病率及死亡率較高，且PA對(duì)多種抗菌藥物耐藥，給臨床治療帶來(lái)極大難題。研究發(fā)現(xiàn)，PA對(duì)亞胺培南的耐藥機(jī)制主要包括外膜蛋白OprD2表達(dá)缺失以及產(chǎn)生金屬β-內(nèi)酶胺酶（以IMP、VIM多見(jiàn)）兩方面。本研究擬分析我院早產(chǎn)兒PA感染的臨床特點(diǎn)及其耐藥情況。并探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord mesenchymal

2、 stem cells, hUCMSCs）體外對(duì)耐亞胺培南銅綠假單胞菌（imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa，IRPA）耐藥性形成的影響及對(duì)OprD2、VIM-2、IMP-9、Inti1基因影響。
　　對(duì)象與方法：
　　臨床研究：選取我院2011年9月～2013年8月NICU送檢標(biāo)本中PA培養(yǎng)陽(yáng)性的115例住院患兒為研究對(duì)象，剔除足月兒病例、重復(fù)病例及定植者后共有53例入選，回顧

3、性分析53例PA感染早產(chǎn)患兒的臨床表現(xiàn)及耐藥情況。
　　基礎(chǔ)研究：實(shí)驗(yàn)組為 hUCMSCs組，對(duì)照組為細(xì)胞對(duì)照組（人肺成纖維細(xì)胞， normal human lung fibroblast, NHLF）和空白對(duì)照組。在次抑菌濃度肉湯誘導(dǎo)PA耐藥傳導(dǎo)過(guò)程中，hUCMSCs組和NHLF組分別加入其與PA共培育的上清液，空白對(duì)照組加入細(xì)胞培養(yǎng)液，觀察三組誘導(dǎo)耐藥所需代數(shù)以及抑菌圈的大小。在誘導(dǎo)耐藥前后分別采用K-B法及Real-time

4、 PCR法測(cè)定PA對(duì)常見(jiàn)抗菌藥物的敏感性及OprD2、VIM-2、IMP-9、Inti1基因的表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　藥敏結(jié)果顯示，53株分離自早產(chǎn)兒臨床標(biāo)本的PA株對(duì)常見(jiàn)抗菌藥物的耐藥率較高，對(duì)曾經(jīng)被認(rèn)為治療多重耐藥性PA感染首選藥物的碳青酶烯類(lèi)抗生素如亞胺培南、美羅培南的耐藥率高達(dá)50.94％和49.06%。而對(duì)于臨床常用于治療新生兒感染的敏感性較高的抗生素為哌拉西林/他唑巴坦（92.45%）、頭孢吡肟（92.45%）

5、、哌拉西林（90.57%）和頭孢他啶（88.68%）。
　　經(jīng)次抑菌濃度的亞胺培南誘導(dǎo)后，hUCMSCs組耐藥性的出現(xiàn)較NHLF組及空白對(duì)照組延遲，NHLF組和空白對(duì)照組于誘導(dǎo)的第17代出現(xiàn)亞胺培南耐藥，而hUCMSCs組于第19代出現(xiàn)耐藥性。Real-time PCR結(jié)果顯示，誘導(dǎo)耐藥后PA中OprD2表達(dá)量較誘導(dǎo)前出現(xiàn)減少或消失。其中hUCMSCs組OprD2的表達(dá)量減少至誘導(dǎo)耐藥前的10.96%，而NHLF及空白對(duì)照組Opr

6、D2無(wú)表達(dá)，即誘導(dǎo)后出現(xiàn)OprD2基因缺失。在誘導(dǎo)耐藥前后的PA株中均未檢測(cè)到VIM-2、IMP-9、Inti1基因的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1.銅綠假單胞菌對(duì)碳青酶烯類(lèi)藥物的耐藥率較高。
　　2.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有延遲PA耐藥性形成的作用。
　　3.外膜蛋白OprD2表達(dá)量減少或缺失是引起PA對(duì)亞胺培南耐藥的原因。
　　4.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞延遲PA耐藥性出現(xiàn)的機(jī)制可能是通過(guò)分泌抗菌肽LL-37和人β