銅綠假單胞菌耐藥性分析及碳青霉烯類耐藥銅綠假單胞菌外排泵MexAB-OprM的相關(guān)研究.pdf

1、目的：
　　1.了解臨床分離的銅綠假單胞菌的分布情況以及其對(duì)臨床常用抗菌藥物的耐藥性,為臨床醫(yī)生抗感染治療提供依據(jù),指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理使用抗菌藥物。
　　2.了解外排泵MexAB-OprM在耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌中所起的作用。
　　3.研究外排泵MexAB-OprM表型陽性菌株中外排泵調(diào)控基因mexR、nalC及nalD的突變情況。
　　方法：
　　采用紙片擴(kuò)散法（K-B法)檢測(cè)臨床分離的459株銅綠假單胞

2、菌(P.aeruginosa)對(duì)13種抗菌藥物的敏感性;瓊脂稀釋法檢測(cè)75株碳青霉烯類耐藥 P.aeruginosa亞胺培南及美羅培南的最低抑菌濃度(MIC),并聯(lián)合外排泵抑制劑(MC207110)進(jìn)行外排泵表型的篩選,PCR擴(kuò)增外排泵表現(xiàn)陽性的13株銅綠假單胞菌的外排泵基因 mexB,并擴(kuò)增 mexB陽性菌株的外排泵MexAB-OprM的調(diào)控基因mexR、nalC及nalD,所得PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序并比對(duì)。熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Rea

3、l-time PCR)檢測(cè)外排泵表型篩選陽性的13株菌外排泵基因mexA mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　459株P(guān).aeruginosa的藥敏結(jié)果顯示:氨曲南的耐藥率為82.3％,阿米卡星的耐藥率為15.2%,亞胺培南和美羅培南的耐藥率分別為23.4%和22.6%,頭孢他啶、頭孢哌酮以及哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率相對(duì)較高,為36.6%~37.6%之間。添加外排泵抑制劑MC207110后對(duì)亞胺培南和美羅培南的作用結(jié)果顯

4、示:75株碳青霉烯類耐藥P.aeruginosa,有13(17.3%)株對(duì)亞胺培南和(或)美羅培南的MIC下降4倍及4倍以上,重新編號(hào)為PA1至PA13。13株外排泵表型陽性菌株10株菌mexB表達(dá)陽性,10株菌的外排泵調(diào)控基因mexR、nalC及nalD均陽性,共有9株菌NalC均發(fā)生第71位氨基酸突變:甘氨酸(Gly)→谷氨酸(Glu)、其中8株菌同時(shí)還發(fā)生第209位氨基酸突變:絲氨酸(Ser)→精氨酸(Arg),僅發(fā)現(xiàn)1株菌Nal

5、D第158位氨基酸突變:蘇氨酸(Thr)→異亮氨酸(Ile)、8株菌MexR發(fā)生突變。PA4、PA5及PA2此3株菌mexA的相對(duì)表達(dá)量最高,分別為10.26倍、8.83倍以及6.12倍,有6株菌mexA基因相對(duì)表達(dá)量小于2倍。
　　結(jié)論：
　　1.本研究中臨床分離的P.aeruginosa標(biāo)本來源以痰標(biāo)本(64.7%)最多,感染科室以呼吸內(nèi)科分離率(17.4%)最高。
　　2.本研究中臨床分離的P.aeruginos

6、a對(duì)阿米卡星耐藥率最低,其次為頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢吡肟、美羅培南及亞胺培南等,臨床經(jīng)驗(yàn)性治療可選上述一種藥物或兩種藥物聯(lián)合治療。
　　3.外排泵MexAB-OprM高表達(dá)菌株均存在調(diào)控基因的突變。
　　4.外排泵MexAB-OprM的高表達(dá)在P.aeruginosa對(duì)碳青霉烯類耐藥中起到重要作用。
　　5.外排泵 MexAB-OprM的調(diào)控基因 mexR第54位氨基酸亮氨酸→脯氨酸(Leu→Pro)、第37位氨基酸脯