保定地區(qū)銅綠假單胞菌耐藥性和耐藥基因的分析研究.pdf

1、目的:
　　 1、明確我院臨床分離的銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)耐藥性及各種β-內(nèi)酰胺酶編碼基因、外膜通道蛋白OprD2基因存在狀況。
　　 2、了解我院銅綠假單胞菌耐藥情況及特點(diǎn)，指導(dǎo)臨床醫(yī)師合理使用抗生素，延緩細(xì)菌耐藥產(chǎn)生、有效預(yù)防及控制院內(nèi)感染。
　　 方法:
　　 1、根據(jù)衛(wèi)生部《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第3版的要求，嚴(yán)格無菌操作，用羊血培養(yǎng)基對(duì)臨床送檢標(biāo)本進(jìn)行

2、細(xì)菌的分離培養(yǎng)，用VITEK-2全自動(dòng)微生物鑒定儀鑒定菌種。
　　 2、對(duì)我院2012年07月-2012年12月臨床分離的69株銅綠假單胞菌進(jìn)行純化后，采用VITEK-2全自動(dòng)微生物鑒定儀和K-B法測(cè)定其對(duì)氨芐西林等25種抗菌藥物的敏感性。
　　 3、用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)法檢測(cè)19種銅綠假單胞菌相關(guān)耐藥基因。
　　 4、對(duì)銅綠假單胞菌耐藥基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

3、進(jìn)行了測(cè)序，并將測(cè)序結(jié)果與GenBank登錄的結(jié)果進(jìn)行比對(duì)。
　　 結(jié)果:
　　 1、69株銅綠假單胞菌對(duì)阿米卡星、氨芐西林、環(huán)丙沙星、慶大霉素、呋喃妥因、妥布霉素、復(fù)方新諾明、氨芐西林/舒巴坦、頭孢他啶、亞胺培南、哌拉西林、氨曲南、頭孢唑林、頭孢吡肟、左氧氟沙星、美羅培南、頭孢哌酮、頭孢替坦、頭孢曲松、米諾環(huán)素、哌拉西林+他唑巴坦（常規(guī)用量）、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢呋辛脂、頭孢呋辛鈉、比阿培南的耐藥率分別為11.6％、

4、98.6％、31.9％、43.5％、97.1％、43.5％、98.6％、97.1％、20.3％、31.9％,24.6％,36.2％、98.6％、21.7％、24.6％、34.6％、43.5％、95.7％、95.7％,52.2％、17.4％、17.4％、98.6％、98.6％、42.0％。
　　 2、69株銅綠假單胞菌中β-內(nèi)酰胺酶編碼基因TEM、TEM-1、SHV、PER, VEB, GES、OXA-1、OXA-2、OXA-10

5、、CTX-M-1、CTX-M-3、CTX-M-9的檢出率分別為15.9％、10.1％、7.2％、2.9％、1.4％、2.9％、31.9％、15.9％、14.5％、23.2％、8.7％、7.2％。
　　 3、金屬β-內(nèi)酰胺酶基因VIM、IMP、SIM、SPM、GIM的檢出率分別是26.1％、18.8％、0.0％、7.2％、0.0％。
　　 4、質(zhì)粒AmpC酶基因DHA的檢出率是10.1％。
　　 5、膜孔蛋白Opr

6、D2基因的缺失率為46.4％。
　　 6、DHA、TEM、TEM-1和PER等4個(gè)基因的核苷酸序列與Genebank中參比基因序列同源性均為100％，未發(fā)現(xiàn)基因變異現(xiàn)象。
　　 結(jié)論:
　　 1、本院銅綠假單胞菌對(duì)頭孢唑林(98.6％)、頭孢呋辛脂(98.6％)、頭孢呋辛鈉(98.6％)，氨芐西林(98.6％)、復(fù)方新諾明(98.6％)等抗生素有很高的耐藥率。
　　 2、β-內(nèi)酰胺酶編碼基因檢出率比較高(

7、78.3％)，陽(yáng)性率最高的幾種是:OXA-1(31.9％)、VIM(26.1％)、CTX-M-1(23.2％);OprD2基因缺失率高(46.4％)。提示銅綠假單胞菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的多重耐藥可能是由多種耐藥基因共同控制的，該菌具有復(fù)雜的耐藥機(jī)制。
　　 3、DHA、TEM、TEM-1和PER等4個(gè)基因的核苷酸序列與Genebank中參比基因序列同源性均為100％，未發(fā)現(xiàn)基因變異現(xiàn)象。
　　 4、應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)銅綠假單