?；撬釋?duì)大腸桿菌-金黃色葡萄球菌引起的乳腺上皮細(xì)胞天然免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、本研究以乳腺上皮細(xì)胞系(EpH4-Ev、MAC-T)、大腸桿菌NJ0501(Escherichia coliN J0501，E.coli NJ0501)及金黃色葡萄球菌WX0801（Staphylococcus aureus WX0801，S.aureus WX0801）為研究對(duì)象，通過E.coliNJ0501或S.aureus WX0801與乳腺上皮細(xì)胞共孵育，探討大腸桿菌或金黃色葡萄球菌感染引起乳腺的天然免疫反應(yīng);并在此基礎(chǔ)上，揭示

2、?；撬釋?duì)此天然免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制。結(jié)果如下:
　　1小鼠乳腺上皮細(xì)胞EpH4-Ev與牛乳腺上皮細(xì)胞MAC-T應(yīng)對(duì)細(xì)菌感染能力的比較
　　為探討EpH4-Ev細(xì)胞是否能夠用來代替MAC-T細(xì)胞作為乳腺炎模型細(xì)胞。本研究以EpH4-Ev細(xì)胞和MAC-T細(xì)胞為研究對(duì)象，檢測(cè)了乳腺炎致病菌(E.coli NJ0501和S.aureus WX0801)與乳腺上皮細(xì)胞(EpH4-Ev或MAC-T)共孵育后細(xì)胞上清液中N-乙酰-β-

3、D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase，NAGase)活性和細(xì)胞中活性氧(reactive oxygen species，ROS)含量的變化。研究發(fā)現(xiàn):乳腺炎致病菌能夠感染上述兩種乳腺上皮細(xì)胞并引起相關(guān)的炎癥反應(yīng)，而?；撬崽幚韯t對(duì)致病菌在這兩種細(xì)胞上引起的炎癥反應(yīng)都有一定的緩解作用。乳腺炎致病菌感染EpH4-Ev細(xì)胞2h后細(xì)胞上清液中NAGase的活性和細(xì)胞中ROS的含量都顯著升高(P＜0.05)，

4、這一結(jié)果與致病菌感染MAC-T細(xì)胞得到的結(jié)果一致。結(jié)果表明:EpH4-Ev細(xì)胞可以用來代替MAC-T細(xì)胞作為乳腺炎模型細(xì)胞。
　　2大腸桿菌感染乳腺上皮細(xì)胞引起的天然免疫及?；撬岬恼{(diào)節(jié)作用
　　為探討大腸桿菌(Escherichia coli，E.coli)引起的乳腺上皮細(xì)胞的天然免疫反應(yīng)及牛磺酸對(duì)其調(diào)理作用，本研究以乳腺上皮細(xì)胞和E.coli NJ0501為研究對(duì)象，首先檢測(cè)E.coli NJ0501與乳腺上皮細(xì)胞共孵育后

5、細(xì)胞產(chǎn)生的炎性變化;在此基礎(chǔ)上探究?；撬釋?duì)E.coli感染乳腺上皮細(xì)胞引起的天然免疫應(yīng)答的影響。研究發(fā)現(xiàn):E.coliNJ0501能夠感染乳腺上皮細(xì)胞并引起炎癥反應(yīng)，?；撬崽幚韺?duì)其引起的炎癥反應(yīng)有一定的減緩作用。E.coli NJ0501感染乳腺上皮細(xì)胞2h后Toll樣受體(toll-like receptor，TLR)2、TLR4、髓樣分化因子（myeloiddifferentiationfactor88，MyD88）、誘導(dǎo)型一氧化氮

6、合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)、腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosisfactor-α，TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）mRNA表達(dá)水平(P＜0.05）和TLR2、TLR4、MyD88蛋白表達(dá)水平及細(xì)胞上清液中NAGase活性、細(xì)胞中ROS含量、丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量顯著提高(P＜0.05);超氧化物歧化酶(

7、superoxide dismutase，SOD)活性、總抗氧化能力(Total antioxidant capacity，T-AOC)的水平的顯著下降(P＜0.05）;牛磺酸預(yù)處理細(xì)胞能顯著降低TLR2、TLR4、MyD88、iNOS、TNF-α、IL-1β的mRNA和TLR2、TLR4、MyD88蛋白表達(dá)水平(P＜0.05)，顯著降低細(xì)胞培養(yǎng)液上清中NAGase的活性和細(xì)胞中ROS與MDA的含量(P＜0.05)，顯著提高SOD活性和

8、T-AOC的水平(P＜0.05）。研究結(jié)果表明:牛磺酸可以減弱因E.coliN J0501感染而引起的乳腺上皮細(xì)胞的炎性變化。
　　3金黃色葡萄球菌感染乳腺上皮細(xì)胞引起的天然免疫及?；撬岬恼{(diào)節(jié)作用
　　為探討金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，S.aureus)感染乳腺上皮細(xì)胞后引起的天然免疫反應(yīng)及?；撬釋?duì)其的調(diào)理作用，本研究以乳腺上皮細(xì)胞和S.aureusWX0801為研究對(duì)象，首先檢測(cè)S.aure

9、us WX0801與乳腺上皮細(xì)胞共孵育后細(xì)胞產(chǎn)生的炎性變化;在此基礎(chǔ)上探究?；撬釋?duì)S.aureus感染乳腺上皮細(xì)胞引起的天然免疫應(yīng)答的影響。研究發(fā)現(xiàn):S.aureus WX0801能夠感染乳腺上皮細(xì)胞并引起炎癥反應(yīng)，?；撬崽幚韺?duì)其引起的炎癥反應(yīng)有一定的降低作用。S.aureus WX0801感染細(xì)胞2h后TLR2、TLR4、MyD88、iNOS、TNF-α mRNA、TLR2蛋白表達(dá)水平(P＜0.05）及細(xì)胞上清液中NAGase活性、細(xì)

10、胞中ROS與MDA的含量顯著提高(P＜0.05);SOD活性、T-AOC活性顯著下降(P＜0.05）;而?；撬犷A(yù)處理細(xì)胞則能顯著降低TLR2、TLR4、MyD88、iNOS、TNF-α的mRNA和TLR2蛋白的表達(dá)水平(P＜0.05)，顯著降低細(xì)胞培養(yǎng)液上清中NAGase的活性和細(xì)胞中ROS與MDA的含量(P＜0.05)，顯著提高SOD和T-AOC的活性(P＜0.05）。研究結(jié)果表明:?；撬峥梢詼p弱因S.aureus WX0801感染而