檸檬酸循環(huán)調(diào)節(jié)金黃色葡萄球菌金黃色素的產(chǎn)生.pdf

1、金黃色葡萄球菌是引起院內(nèi)感染和社區(qū)感染的重要人類病原菌。典型的金黃色葡萄球菌為球型，顯微鏡下可見排列成葡萄串狀，因此被稱為葡萄球菌。同時，由于它能產(chǎn)生一種金黃色的類胡蘿卜素而獲得了金黃色葡萄球菌的名稱。這種金黃色的類胡蘿卜素的色素(Staphyloxanthin)增強(qiáng)了細(xì)菌對氧化脅迫和對宿主嗜中性粒細(xì)胞吞噬的抵抗能力，可以幫助細(xì)菌逃避宿主的免疫系統(tǒng)，與細(xì)菌的毒力有著密切的聯(lián)系。
　　 在我們實驗室先前的研究工作中，我們發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)座子

2、插入到檸檬酸合成酶citZ基因中導(dǎo)致金黃色葡萄球菌產(chǎn)生金黃色色素的能力顯著增強(qiáng)(在不含葡萄糖的TSB培養(yǎng)基中)，暗示著金黃色葡萄球菌的檸檬酸循環(huán)對金黃色色素的產(chǎn)生具有重要的調(diào)節(jié)功能。在我的研究工作中，主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　 1、通過分子克隆、功能互補(bǔ)證實了citZ基因的突變影響了金黃色色素的產(chǎn)生。在調(diào)節(jié)方式上，發(fā)現(xiàn)在不含葡萄糖的TSB的培養(yǎng)基中，citZ基因負(fù)調(diào)節(jié)金葡菌金黃色色素的產(chǎn)生；而在含葡糖糖的TSB培養(yǎng)基中，ci

3、tZ基因正調(diào)節(jié)金葡菌金黃色色素的產(chǎn)生。
　　 2、通過分子克隆、功能互補(bǔ)進(jìn)一步證實了檸檬酸循環(huán)途徑中另一個關(guān)鍵基因，citG基因，也調(diào)節(jié)了金黃色葡萄球菌金黃色色素的產(chǎn)生并與citZ基因有類似的調(diào)節(jié)方式。
　　 3、通過檢測金黃色葡萄球菌中乙酰輔酶A的含量，發(fā)現(xiàn)在不含葡萄糖的TSB的培養(yǎng)基中，citZ基因的突變導(dǎo)致了乙酰輔酶A積累。而在含葡萄糖的培養(yǎng)條件下，citZ基因的突變并沒有引起乙酰輔酶A的積累；相反，與野生型菌株相

4、比，citZ基因突變體中乙酰輔酶A的含量顯著減少5倍左右。
　　 4、利用分子克隆、功能互補(bǔ)證實了甲羥戊酸途徑中ispA基因是金黃色葡萄球菌產(chǎn)生金黃色色素所必須的。
　　 5、利用HPLC分析甲羥戊酸途徑中的代謝產(chǎn)物。發(fā)現(xiàn)在不含葡萄糖的TSB的培養(yǎng)基中，citZ基因的突變導(dǎo)致有關(guān)甲羥戊酸途徑中的代謝產(chǎn)物的累積。
　　 6、利用基因表達(dá)譜分析，發(fā)現(xiàn)citZ基因的突變影響了209個基因的表達(dá)。其中41個相關(guān)的基因上調(diào)

5、：168個相關(guān)的基因下調(diào)。在上調(diào)的基因中有10個基因是與轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的，13個基因與代謝相關(guān)，7個基因與脅迫相關(guān)，4個基因與調(diào)節(jié)功能相關(guān)，假設(shè)蛋白的有9個基因涉及其他的功能有5個基因；在下調(diào)的基因中有35個基因是與轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的，14個基因與毒素表達(dá)相關(guān)，18個基因與脂肪酸代謝相關(guān)，16個基因與碳水化合物代謝相關(guān)，5個基因與甘油代謝相關(guān)，5個基因與三羧酸循環(huán)相關(guān)，2個基因與尿素代謝相關(guān)，3個硝酸鹽代謝相關(guān)，7個基因與調(diào)節(jié)功能相關(guān)，假設(shè)蛋白的有9