納他霉素滴眼劑治療家兔真菌性角膜炎的藥理作用研究.pdf

1、真菌性角膜炎(flangal keratitis,FK)是致盲率較高的化膿性角膜病,常常發(fā)生于植物性角膜外傷后。近年來,其發(fā)病率在我國明顯升高,主要與廣泛應(yīng)用廣譜抗生素及皮質(zhì)類固醇激素,或長期配戴角膜接觸鏡和免疫抑制劑的應(yīng)用有關(guān),另外由于抗腫瘤藥物的廣泛應(yīng)用,器官移植和導(dǎo)管手術(shù)的廣泛開展及艾滋病的出現(xiàn)和傳播,也使得致病性真菌感染的幾率增加,因此真菌性角膜炎的發(fā)生率逐年升高。
　　 由于真菌性角膜炎發(fā)病機(jī)制尚不清楚且缺乏有效藥物,

2、所以治療棘手,預(yù)后差,可引起嚴(yán)重的角膜潰瘍,常導(dǎo)致角膜穿孔、眼內(nèi)炎,甚至角膜盲以及眼球喪失等,因此真菌性角膜炎目前仍是眼科醫(yī)師乃至全世界眼科領(lǐng)域所面臨的一大難題。
　　 1978年,由美國愛爾康公司(Alcon)開發(fā)的5％納他霉素混懸液可有效治療真菌性角膜炎,商品名那特真(Natacyn),經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)用于臨床,國外早已將納他霉素作為治療真菌性角膜炎的一線藥物。我國目前也有那特真的廣泛應(yīng)用,但尚無具有自主知識產(chǎn)權(quán)的此類產(chǎn)品上

3、市。石藥集團(tuán)最新研制的納他霉素滴眼劑,觀察其治療兔眼真菌性角膜炎藥理作用,為該藥物的順利上市及其在臨床的應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
　　 第一部分茄病鐮刀菌生長特性及溫度對其生長情況的影響
　　 目的:
　　 探討不同孵育溫度對茄病鐮刀菌生長狀態(tài)的影響,為獲得大量孢子尋找最佳方案。
　　 方法:
　　 茄病鐮刀菌按孵育溫度不同分6組,A組、B組、C組、D組、E組分別于20℃、25℃、30℃、35℃、37℃

4、溫箱黑暗孵育7 d,F組于35℃溫箱黑暗孵育3 d再于25℃溫箱黑暗孵育至7 d,在培養(yǎng)24 h,3 d,5 d,7 d時分別用游標(biāo)卡尺測量各組菌落直徑,在培養(yǎng)3 d,5 d,7 d時用血平板計數(shù)器計數(shù)產(chǎn)孢量。
　　 結(jié)果:
　　 在20℃～30℃范圍內(nèi)茄病鐮刀菌菌落生長速度隨溫度升高而增大,在30℃～37℃范圍內(nèi)菌落生長速度隨溫度升高而減小,F組產(chǎn)孢量最多,為1.025×109 CFU／ml,與其他組比較有差異(P<0

5、.05)。
　　 小結(jié):
　　 茄病鐮刀菌在20℃～37℃范圍內(nèi)均可以生長,30℃較適合茄病鐮刀菌菌落生長,35℃溫箱孵育3 d再于25℃溫箱孵育至7 d是獲得大量孢子而非菌絲的最佳方案。
　　 第二部分兔眼真菌性角膜炎模型的建立及病理觀察
　　 目的:
　　 復(fù)制兔眼真菌性角膜炎動物模型,并觀察其病理學(xué)改變。
　　 方法:
　　 新西蘭白兔15只(30只眼),分正常對照組、假手術(shù)

6、組、模型組,模型組采用角膜基質(zhì)注射法注射茄餅鐮刀菌菌液建立茄病鐮刀菌性角膜炎模型,假手術(shù)組注射生理鹽水,正常對照組不做任何處理。各組于接種后2 d角膜刮片行真菌培養(yǎng),接種后15 d處死家兔,取角膜,PAS染色觀察角膜感染真菌情況,HE染色觀察角膜組織病理學(xué)改變,透射電鏡觀察角膜超微結(jié)構(gòu)變化。
　　 結(jié)果:
　　 模型組10只兔眼角膜刮片真菌培養(yǎng)均可見典型真菌菌落生長；正常對照組和假手術(shù)組均為陰性,與模型組相比有差異(P<

7、0.05)；模型組PAS染色可見角膜基質(zhì)層間有菌絲,且呈平行生長；正常對照組和假手術(shù)組未見有菌絲。HE染色顯示角膜基質(zhì)細(xì)胞排列紊亂,有大量中性粒細(xì)胞浸潤；正常對照組和假手術(shù)組角膜基質(zhì)細(xì)胞排列整齊,未見中性粒細(xì)胞浸潤。透射電鏡結(jié)果顯示模型組角膜前上皮增生,分層,大空泡形成；正常對照組和假手術(shù)組可見角膜細(xì)胞周圍有大量的膠原原纖維,角膜細(xì)胞核一端的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見游離的核糖體和少量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及線粒體,結(jié)構(gòu)完整,排列整齊。
　　 小結(jié):<

8、br>　　 角膜基質(zhì)注射法可以成功建立兔眼的真菌性角膜炎模型。
　　 第三部分納他霉素滴眼劑治療兔眼真菌性角膜炎的藥效研究
　　 目的:
　　 探討國產(chǎn)納他霉素滴眼劑對真菌性角膜炎的治療作用,為其在臨床應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 成年健康新西蘭白兔30只(60只兔眼),隨機(jī)分為6組:正常對照組、生理鹽水組、真菌性角膜炎(FK)模型組、Natacyn組、納他霉素組和納他霉素滴眼劑賦形劑

9、組。每組10只兔眼。角膜基質(zhì)注射法建立真菌性角膜炎模型。各組動物于造模后第4 d、10 d、15 d、和21 d于裂隙燈下觀察兔眼潰瘍情況并評分,第10 d和21 d觀察兔眼治愈情況,并記錄造模后至用藥結(jié)束各組角膜發(fā)生新生血管、虹膜炎、前房積膿、斑翳等合并癥的兔眼數(shù)。
　　 結(jié)果:
　　 (1)各組動物造模后4 d、10 d、15 d、和21 d兔眼潰瘍評分:與正常對照組相比,模型組評分顯著升高(P<0.05)；Nata

10、cyn組和納他霉素組與模型組相比評分顯著降低(P<0.05)；納他霉素組和Natacyn組相比無明顯差異(P>0.05)；生理鹽水組和納他霉素賦形劑組與模型組相比評分無明顯差異(P>0.05)。(2)納他霉素治療兔眼真菌性炎癥的痊愈情況:與正常對照組比較,模型組于造模后第10 d、第21 d兔眼痊愈率均明顯降低(P<0.05)。與模型組比較,生理鹽水組和賦形劑組無明顯差異(P>0.05)；Natacyn組和納他霉素組兔眼痊愈率均明顯升高

11、(P<0.05)。與Natacyn組比較,納他霉素組治愈兔眼數(shù)無明顯差異(P>0.05)。(3)納他霉素治療兔眼真菌性炎癥發(fā)生合并癥情況:與正常對照組比較,模型組發(fā)生新生血管、虹膜炎、前房積膿、斑翳各種合并癥的兔眼數(shù)均明顯增多(P<0.05)。與模型組比較,納他霉素組和Natacyn組發(fā)生各種合并癥的兔眼數(shù)均明顯減少(P<0.05)；生理鹽水組與賦形劑組發(fā)生各種合并癥的兔眼數(shù)與模型組比較均無明顯差異(P>0.05)。與Natacyn組比

12、較,納他霉素組發(fā)生合并癥的兔眼數(shù)無明顯差異(P>0.05)。
　　 小結(jié):
　　 納他霉素滴眼劑可顯著降低真菌性角膜炎兔眼潰瘍評分,提高痊愈率,有效預(yù)防并發(fā)癥,納他霉素滴眼劑對兔眼真菌性角膜炎有顯著療效。
　　 第四部分納他霉素滴眼劑對兔眼的刺激性研究
　　 目的:
　　 探討納他霉素滴眼劑對正常兔眼的刺激性,為納他霉素滴眼劑在臨床安全應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 實驗分

13、為4組:生理鹽水組、納他霉素滴眼劑組、納他霉素滴眼劑賦形劑組、那特真組。每組隨機(jī)10只兔眼,用藥每天(8～10)次,每次1滴,連續(xù)應(yīng)用至第21 d,停藥后觀察2 d。采用雙盲法用裂隙燈觀察兔眼刺激情況并評分。
　　 結(jié)果:
　　 各實驗組藥物對正常兔眼均無刺激性,與生理鹽水組比較,差異均無顯著性(P<0.05)。
　　 小結(jié):
　　 納他霉素滴眼劑對兔眼無刺激性,有著良好的發(fā)展前景。
　　 結(jié)論<

14、br>　　 1.茄病鐮刀菌在20℃～37℃范圍內(nèi)均可以生長,30℃較適合茄病鐮刀菌菌落生長,35℃溫箱孵育3 d再于25℃溫箱孵育至7 d是獲得大量孢子而非菌絲的最佳方案。
　　 2.角膜基質(zhì)注射法可以成功建立兔眼的真菌性角膜炎模型。
　　 3.納他霉素滴眼劑可顯著降低真菌性角膜炎兔眼潰瘍評分,提高痊愈率,有效預(yù)防并發(fā)癥,納他霉素滴眼劑對兔眼真菌性角膜炎有顯著療效。
　　 4.納他霉素滴眼劑對兔眼無刺激性,有著