細胞因子在癲癇發(fā)病過程中的作用機制研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文細胞因子在癲癇發(fā)病過程中的作用機制研究姓名：劉子建申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：朱長庚;劉慶瑩2003.4.1華中科技大學(xué)簡濟凝學(xué)院群±學(xué)位論文————————————————————H ———————————w - ———_ —————_ ㈣——_ ——————_ M ——————一一一星形膠矮細胞是腦內(nèi)數(shù)量最多姻一類膠質(zhì)細胞，為研究致瘸劑對星形膠矮細胞的俸蠲以及攫形膠霞細濰激

2、活菇合成、釋赦豹紉魏毽子在癲癇發(fā)生和復(fù)笈中的作靂，我們弼T N F ，。反義褰核苷酸作為工其磷究了星形膠質(zhì)細胞釋放的T N F ．。在癲癇中的作用。首先純化培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞，以其特異性標記物G F A P 免疫細胞化學(xué)簽定其純度。在陽離子脂威{ 搴L i p o f e e t A M I N E 介導(dǎo)下，熄T N F ．n 反義寡核螢酸導(dǎo)入星形膠質(zhì)細煦，褥繪予致瘸剩馬桑杰酸C L ( 2 。5 ×1 0 - 5 m o l

3、／L ) 蒯激，褒不豳對閆點，嗣R I A 法襝溺鬟形膠質(zhì)細脆培養(yǎng)基中T N F a 含量的敵交，用免疫組億方法觀察N F KB p 6 5 核轉(zhuǎn)位情況，用W e s t e r n B l o t 方法檢測I KB a 降解的變化。結(jié)果顯示：純化培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞，G F A P 陽性細胞> 9 5 ％；在應(yīng)用T N F - a 反義寡核巷酸后，幽C L 刺激弓I 起的星形膠質(zhì)細胞合成、釋放T N F ·8 在2 、《

4、、1 2 、2 4 h 基萋減少( p < 0 ．0 1 ) ，N F KB p 6 5 核轉(zhuǎn)垃襲褶瀚靜4 個時悶點也均受到萌顯季尜制，相纛艴漿蛋盤的l KB G 降熊也低于對照組。實驗結(jié)巢提示：在體外培養(yǎng)細胞C L 癲癇模型中，T N F —a 在星形膠質(zhì)細胞的激活過程中發(fā)揮重要作用，并且作為遘要的繼發(fā)因索，參與癲癇的發(fā)生和復(fù)發(fā)。我們原慈豹工{ 擘涯疆：T N F a 霹倥糌綴無谷氨酸( G l u t a m a t e ，G

5、 1 掛)鳧疫發(fā)瘟增強并能誘導(dǎo)F o s 表述。囂此我們用免疫細脆仡學(xué)方法觀察了用T N F ．Q 反義褰核苷酸處理后的整形膠質(zhì)細胞條件培養(yǎng)基對純化培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的影響。在C L 刺激條件培養(yǎng)基組，神經(jīng)元F o s 表達在3 0 r a i n 即褥到明駐誘導(dǎo)，6 0 m i n F o s 免疫陽性颼梭百分率達7 l f 3 ±1 ．5 2 ％：G t u 免疫反殘在3 0 r a i n 黠顯萋秀離；s p i n o