孕酮在犬子宮蓄膿發(fā)病過程中的作用研究.pdf

1、隨著我國寵物行業(yè)的發(fā)展，人們對寵物的健康越來越重視，而子宮蓄膿是危害寵物健康的重要疾病之一，尤其是對老年寵物的健康影響較為嚴(yán)重。犬子宮蓄膿早在上個世紀(jì)五十年代首次由Dow提出，該病的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為犬子宮蓄膿是在細(xì)菌和激素共同作用下引起的。并且孕酮在該病的發(fā)病機(jī)制上的作用不容忽視，Dow曾通過對健康犬進(jìn)行外源性注射孕酮，成功地復(fù)制了該病的病例模型，并發(fā)現(xiàn)在同時注射雌激素的情況下，會減少復(fù)制病例模型時所需的孕酮注射量。為了進(jìn)

2、一步探討犬子宮蓄膿的發(fā)病機(jī)制，研究孕酮在犬子宮蓄膿發(fā)病過程中的作用，本試驗(yàn)從細(xì)胞水平上通過對子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)以及免疫組化法(ICH)檢測孕酮受體兩方面探討孕酮對子宮蓄膿發(fā)病的影響關(guān)系，為該病的發(fā)病機(jī)制提供可靠的臨床依據(jù)，并為犬科動物的體外細(xì)胞培養(yǎng)提供依據(jù)。
　　通過子宮卵巢摘除術(shù)分別無菌采取健康犬與發(fā)病犬子宮角，進(jìn)行常規(guī)石蠟切片、HE染色觀察發(fā)病犬子宮組織的病理變化;同時對組織切片進(jìn)行孕酮受體的免疫組化檢測(IHC)，對比

3、觀察健康犬與發(fā)病犬子宮內(nèi)的孕酮受體敏感性變化;將無菌采取的健康犬子宮進(jìn)行內(nèi)膜上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)，并將所獲得的細(xì)胞隨機(jī)分為對照組、雌激素刺激組、孕酮刺激組、雌激素孕酮共同刺激組，通過對相同面積內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，比較激素對細(xì)胞體積的影響作用。
　　將無菌采取的10例健康犬與10例發(fā)病犬的子宮角清洗后進(jìn)行標(biāo)記，并用4％甲醛進(jìn)行固定備用。然后分別做石蠟切片，標(biāo)記后備用。采用HE染色后，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明發(fā)病犬子宮內(nèi)膜層不完整、并呈現(xiàn)出不同程度的

4、萎縮、脫落，與健康犬相比發(fā)病犬子宮內(nèi)膜層的腺體數(shù)量增多、較嚴(yán)重的病例組織中腺管出現(xiàn)擴(kuò)張并伴有不同程度的炎性細(xì)胞浸潤，在子宮壁增厚的病例中，還可觀察到肌肉層水腫的現(xiàn)象。但就本實(shí)驗(yàn)所采集的病例中，在出現(xiàn)子宮蓄膿后大部分犬的子宮壁變薄，子宮組織不完整。
　　采用免疫組化法(IHC)測定孕酮受體結(jié)果:經(jīng)過IHC染色后，所采取的健康組犬子宮角有3例孕酮受體檢測結(jié)果為陰性，其余7例均為陽性。而發(fā)病組犬的子宮中，其孕酮受體檢測結(jié)果均為陽性，并且

5、集中分布在腺體周圍。
　　細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果:將無菌術(shù)采取的健康犬子宮角清洗后，進(jìn)行子宮內(nèi)膜原代細(xì)胞培養(yǎng)。利用不同濃度的孕酮(30 ng/mL，35 ng/mL，40 ng/mL)、雌激素（30 pg/mL，35pg/mL）對犬子宮內(nèi)膜原代細(xì)胞進(jìn)行刺激培養(yǎng)，在相同培養(yǎng)時間內(nèi)，在相同面積內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并進(jìn)行比較分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)孕酮刺激組的細(xì)胞體積與對照組相比明顯增大(P＜0.01)，孕酮與雌激素共同刺激組的細(xì)胞體積也明顯增大(P＜0.01

6、)，而雌激素刺激組的細(xì)胞體積變化不明顯(P＞0.05)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，犬在患有子宮蓄膿后，子宮壁會變薄，子宮內(nèi)膜層根據(jù)病情呈現(xiàn)出不同程度的萎縮以及脫落，嚴(yán)重的病例肌層也會出現(xiàn)萎縮;在發(fā)病過程中，子宮內(nèi)的腺體增多，擴(kuò)張，并伴有不同程度的炎性細(xì)胞浸潤;發(fā)病初期犬的子宮內(nèi)膜層還會出現(xiàn)不同程度的囊性增生。免疫組化結(jié)果表明，犬在發(fā)病時其子宮內(nèi)孕酮受體敏感性增高，使孕酮對子宮的作用增強(qiáng)。子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)結(jié)果表明，孕酮會導(dǎo)致子宮