外源性硫化氫對(duì)阿霉素心肌病大鼠心肌纖維化的影響.pdf

1、目的:本研究以阿霉素誘導(dǎo)的心肌病大鼠為研究對(duì)象，探討外源性硫化氫是否通過調(diào)控TGF-β1及其下游途徑中MMP-2和MMP-9的表達(dá)，減輕心肌纖維化。為抑制心肌纖維化提供新的理論依據(jù)。
　　方法:40只雄性Sprague—Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分為4個(gè)組別:①阿霉素(adriamyein，ADR，多柔比星)組(n=12)，腹腔注射ADR2.5 mg/kg，1次/周;②ADR+硫氫化鈉(NaHS)組(n=12)，腹腔注射ADR2

2、.5 mg/kg/周，并NaHS14μmoL/kg/天（在注射ADR1h后）。③NaHS組(n=8)，予NaHS14μmoL/kg/天。④對(duì)照組(n=8)，腹腔注射0.9％氯化鈉溶液，1ml/kg/周。連續(xù)用藥10周，分別于干預(yù)前后用心臟超聲心動(dòng)儀檢測(cè)大鼠心腔內(nèi)徑:包括包括左室舒張末期內(nèi)徑(Left ventricular end-diastolic diameter，LVEDD)、左心室收縮末期內(nèi)徑(Left ventricular

3、end-systolic diameter，LVESD)、室間隔厚度(Interventricular septal thickness，IVS)及左心室后壁(Left ventricularposterior wall，LVPW)，并根據(jù)Teichholtz矯正公式計(jì)算左心室射血分?jǐn)?shù)(Leftventricular ejection fraction，LVEF)和左心室內(nèi)徑縮短率(Left ventricularfraction-Sh

4、ortening.LVFS)。給藥10周后處死動(dòng)物留取心肌標(biāo)本進(jìn)行以下研究:①取各組大鼠心臟組織行石蠟包埋切片并HE染色后，在顯微鏡下觀察大鼠心肌組織病理變化。②用酶聯(lián)免疫吸附(Enzyme-linkedimmunosorbent，ELISA)法分別檢測(cè)大鼠心肌組織中硫化氫(H2S)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor beta1，TGF-β1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2（Matrix metallopro

5、teinase-2，MMP-2）和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrixmetalloproteinase-9，MMP-9)以及Ⅰ型和Ⅲ型膠原的表達(dá)。⑧實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitative PCR，RQ-PCR)技術(shù)檢測(cè)各組大鼠心肌組織中TGF-β1mRNA的表達(dá)量。
　　結(jié)果:1.大鼠生存情況:各組大鼠的存活率分別為:對(duì)照組88％;ADR組50％; ADR+ NaHS組42％; NaHS組75％。2、超聲心

6、動(dòng)圖檢測(cè):ADR組和ADR+ NaHS組LVEDD、LVESD干預(yù)前后比較(P＜0.05);干預(yù)后ADR+ NaHS組LVEDD、LVESD與ADR組比較明顯減小(P＜0.05)，LVEF、LVFS與ADR組比較明顯改善(P＜0.05)，各組大鼠LVPW、IVS比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。3.心肌組織病理學(xué)檢查:ADR組心肌細(xì)胞排列紊亂，部分心肌細(xì)胞出現(xiàn)纖維斷裂、胞質(zhì)溶解等變性、壞死現(xiàn)象;而ADR+ NaHS組大鼠心肌細(xì)胞排列正常

7、，變性及壞死現(xiàn)象明顯減少，僅見部分心肌細(xì)胞空泡變性;NaHS組大鼠與對(duì)照組相似心肌細(xì)胞無明顯改變。4.ELISA結(jié)果:①ADR組和ADR+ NaHS組大鼠心肌組織中Ⅰ和Ⅲ型膠原的表達(dá)與對(duì)照組比較明顯升高(P＜0.05)，ADR+ NaHS組與ADR組比較明顯降低(P＜0.05)。②ADR組大鼠心肌組織中H2S的含量與其它三組比較明顯減少(P＜0.05)。③ADR組和ADR+ NaHS大鼠心肌組織中TGF-β1的表達(dá)與對(duì)照組比較明顯升高(

8、P＜0.05)，ADR+ NaHS組與ADR組比較明顯降低(P＜0.05)，而NaHS組與對(duì)照組比較也明顯減少(P＜0.05)。④ADR組和ADR+ NaHS大鼠心肌組織中MMP-2和MMP-9的表達(dá)與對(duì)照組比較明顯升高(P＜0.05)，ADR+ NaHS組與ADR組比較明顯降低（P＜0.05），而NaHS組與對(duì)照組比較無明顯改變（P＞0.05）。5.RQ-PCR結(jié)果:ADR組和ADR+ NaHS組大鼠心肌組織中TGF-β1mRNA的相