維生素D對糖尿病腎病大鼠腎臟纖維化的影響.pdf

1、目的：觀察維生素D對糖尿病腎病（DN）大鼠的腎臟纖維化是否有可逆性治療作用，研究該病理過程中腎臟纖維化相關基因隨著病程進展的表達變化以及當TGF-β1基因高表達及干擾時其他基因隨之出現(xiàn)的變化趨勢。
　　方法：（1）病毒的制備：通過PCR獲得人源TGF-β1目的基因，包裝重組的rLv-TGFβ1過表達慢病毒以及重組的rLv-TGFβ1-ShRNA干擾慢病毒，濃縮純化后，采用熒光法測定慢病毒滴度。（2）大鼠的分組及處理：將108只雄性

2、SD大鼠隨機分為①空白對照組（n=18）②GFP組n=（n=18）③TGF-β1+維生素D組（過表達+VD組；n=18）④TGF-β1+花生油（過表達+花生油組；n=18）⑤Sh RNA-TGF-β1+維生素D組（干擾+VD組；n=18）⑥Sh RNA-TGF-β1+花生油組（干擾+花生油組；n=18）將①-⑥組大鼠分別于3、14、37天分批處死（n=6）處死，留取病毒注射側(cè)大鼠腎臟。（3）檢測的方法：采用HE和Masson染色、電鏡技

3、術、免疫組織化學染色及實時熒光定量PCR技術評價腎臟纖維化程度和維生素D對纖維化的影響，并檢測腎臟纖維化過程中 TGF-β1在過表達及干擾的情況下，CTGF、MCP-1及VDR等相關基因的表達變化。
　　結果：（1）腎臟組織形態(tài)學觀察顯示，空白對照組與GFP組病變程度相似，并且隨著糖尿病腎病模型成模時間逐漸延長，腎臟纖維化程度逐步加重。過表達+VD組與過表達+花生油組相比纖維化程度減輕，干擾+VD組與干擾+花生油組相比纖維化程度減

4、輕。（2）免疫組織化學檢測：與腎臟組織形態(tài)學檢測相似結論。（3）RT-PCR：空白對照組與GFP組基因表達量相似，在TGF-β1基因高表達的情況下，MCP-1、CTGF均出現(xiàn)相對高表達，在維生素D的干預下，隨著時間的延長，基因表達出現(xiàn)逐漸降低的趨勢。在TGF-β1干擾時，MCP-1、CTGF均出現(xiàn)相對低表達，在維生素D的干預下，隨著時間的延長，基因出現(xiàn)逐漸降低的趨勢。VDR基因在維生素D的干預下，隨著時間的延長，基因出現(xiàn)逐漸升高的趨勢。