維生素D對糖尿病腎病大鼠腎臟纖維化的影響.pdf

1、目的：觀察維生素D對糖尿病腎病（DN）大鼠的腎臟纖維化是否有可逆性治療作用，研究該病理過程中腎臟纖維化相關(guān)基因隨著病程進展的表達變化以及當TGF-β1基因高表達及干擾時其他基因隨之出現(xiàn)的變化趨勢。
　　方法：（1）病毒的制備：通過PCR獲得人源TGF-β1目的基因，包裝重組的rLv-TGFβ1過表達慢病毒以及重組的rLv-TGFβ1-ShRNA干擾慢病毒，濃縮純化后，采用熒光法測定慢病毒滴度。（2）大鼠的分組及處理：將108只雄性

2、SD大鼠隨機分為①空白對照組（n=18）②GFP組n=（n=18）③TGF-β1+維生素D組（過表達+VD組；n=18）④TGF-β1+花生油（過表達+花生油組；n=18）⑤Sh RNA-TGF-β1+維生素D組（干擾+VD組；n=18）⑥Sh RNA-TGF-β1+花生油組（干擾+花生油組；n=18）將①-⑥組大鼠分別于3、14、37天分批處死（n=6）處死，留取病毒注射側(cè)大鼠腎臟。（3）檢測的方法：采用HE和Masson染色、電鏡技

3、術(shù)、免疫組織化學(xué)染色及實時熒光定量PCR技術(shù)評價腎臟纖維化程度和維生素D對纖維化的影響，并檢測腎臟纖維化過程中 TGF-β1在過表達及干擾的情況下，CTGF、MCP-1及VDR等相關(guān)基因的表達變化。
　　結(jié)果：（1）腎臟組織形態(tài)學(xué)觀察顯示，空白對照組與GFP組病變程度相似，并且隨著糖尿病腎病模型成模時間逐漸延長，腎臟纖維化程度逐步加重。過表達+VD組與過表達+花生油組相比纖維化程度減輕，干擾+VD組與干擾+花生油組相比纖維化程度減

4、輕。（2）免疫組織化學(xué)檢測：與腎臟組織形態(tài)學(xué)檢測相似結(jié)論。（3）RT-PCR：空白對照組與GFP組基因表達量相似，在TGF-β1基因高表達的情況下，MCP-1、CTGF均出現(xiàn)相對高表達，在維生素D的干預(yù)下，隨著時間的延長，基因表達出現(xiàn)逐漸降低的趨勢。在TGF-β1干擾時，MCP-1、CTGF均出現(xiàn)相對低表達，在維生素D的干預(yù)下，隨著時間的延長，基因出現(xiàn)逐漸降低的趨勢。VDR基因在維生素D的干預(yù)下，隨著時間的延長，基因出現(xiàn)逐漸升高的趨勢。