系列組蛋白去乙?；敢种苿┑目沽龌钚匝芯?pdf

1、惡性腫瘤已成為威脅人類生命健康的殺手之一,因而對腫瘤防治藥物的研發(fā)成為生命科學(xué)研究的當(dāng)務(wù)之急。通過多年來研究發(fā)現(xiàn),組蛋白去乙?；?histonedeacetylase,HDAC)作為調(diào)控基因的關(guān)鍵蛋白酶,其功能異常被證實與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有直接關(guān)系,因此,靶向組蛋白去乙酰化酶抑制劑作為抗腫瘤藥物的研發(fā)備受關(guān)注。
　　MS-275是一種新型的HDAC抑制劑,通過抑制HDAC活性實現(xiàn)其腫瘤防治作用。目前,它進(jìn)入Ⅱ期臨床試驗階段,對白

2、血病及有關(guān)實體瘤的治療顯示出良好的前景。HDAC抑制劑類藥物,對腫瘤組織具有較強(qiáng)的選擇性和靶向性。為此,圍繞MS-275進(jìn)行新型HDAC抑制劑的發(fā)現(xiàn)研究,引起了本領(lǐng)域研究者的極大興趣。
　　本研究首先通過體外實驗,對靶向HDAC的合成系列化合物進(jìn)行抗瘤活性篩,然后選擇活性較好的化合物進(jìn)行體內(nèi)抗瘤活性初步分析,為今后更加深入系統(tǒng)地開展臨床前研究奠定基礎(chǔ)。
　　一、體外研究：:選用的主要人源腫瘤細(xì)胞株,分別為結(jié)腸癌細(xì)胞株Lovo

3、、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549、乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、急性白血病細(xì)胞株HL-60、宮頸癌細(xì)胞株Hela、肝癌細(xì)胞株HepG2、白血病細(xì)胞株K562。實驗時,將對數(shù)生長期的上述各種細(xì)胞,分別接種適量于96孔培養(yǎng)板各孔,經(jīng)不同濃度(10-8～10-5mol/L)的系列化合物作用48～72h,同時設(shè)置相應(yīng)濃度的MS-275作為陽性對照。化合物作用完畢,用MTT法檢測各細(xì)胞株的存活情況。根據(jù)細(xì)胞活性測定結(jié)果,以市售試劑盒檢測部分化合物的HDAC

4、酶抑制活性。結(jié)果表明,多種化合物對不同的腫瘤細(xì)胞具有肯定的增殖抑制活性,部分化合物的半數(shù)抑制濃度值(IC50值)達(dá)到μM級,個別達(dá)到1/10μM級。這些化合物包括Ben-x09、Ben-x11、Ben-x18、Ben-x021、Ben-x022、Ben-x032、Ben-124、Beny-0018及Beny-0019等。其中,部分化合物的細(xì)胞增殖抑制效應(yīng)與其HDAC酶活性抑制作用相對應(yīng)。
　　二、體內(nèi)活性評價：根據(jù)體外篩選結(jié)果,結(jié)

5、合化合物的結(jié)構(gòu)特點,著重對Ben-124、Beny-0018進(jìn)行了體內(nèi)抑瘤活性的初步評價。其中,前者分別利用人源MCF-7乳腺癌和A549非小細(xì)胞肺癌移植裸鼠模型進(jìn)行觀察,后者僅利用乳腺癌模型進(jìn)行觀察。按照常規(guī)皮下注射接種方法,分別將兩種腫瘤培養(yǎng)細(xì)胞接種在裸鼠腋下,當(dāng)瘤體大小達(dá)到50-100mm3時,將裸鼠隨機(jī)分為溶劑對照組、化合物給藥組及陽性對照組。通過灌胃口服給藥,1次/天,連續(xù)21天。實驗期間,觀察裸鼠一般情況,每周分別稱(測)量

6、裸鼠體重及移植瘤體積各兩次。繪制移植瘤生長曲線及計算腫瘤生長抑制率。結(jié)果表明,陽性對照MS-275均能明顯抑制裸鼠兩種移植瘤的生長,腫瘤生長曲線表現(xiàn)為較為平緩,與溶劑對照組相比有顯著性差異(P<0.05),而Ben-124給藥組雖具有一定的抑制作用,但與溶劑對照組相比差異不明顯(P>0.05),Beny0018亦顯示同樣效果。
　　結(jié)論：1.通過體外實驗研究,獲得了具有腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性的若干化合物;2.利用體內(nèi)實驗,對體外抑瘤