版納微型豬糖尿病模型及其Musclin的表達(dá)研究.pdf

1、背景及目的：糖尿病(DM)是一種嚴(yán)重危害人體健康的常見(jiàn)內(nèi)分泌代謝疾病，DM的發(fā)生由胰島素分泌缺乏及(或)其生物作用障礙引起，主要特征表現(xiàn)為高血糖。根據(jù)胰島素缺乏的類(lèi)型，可將糖尿病分為1型糖尿病和2型糖尿病，胰島素抵抗(IR)是二者區(qū)分的關(guān)鍵。在DM發(fā)生過(guò)程中，有多種蛋白和細(xì)胞因子同時(shí)參與，共同調(diào)節(jié)著糖類(lèi)和脂質(zhì)代謝過(guò)程，闡明它們?cè)贒M中的作用機(jī)制，有利于積極預(yù)防和治療DM。已有研究表明肌肉素(Musclin)能明顯地抑制由胰島素促進(jìn)的葡萄

2、糖攝入及糖元合成過(guò)程，推測(cè)Musclin與血糖、胰島素之間存在某種聯(lián)系，Musclin在DM的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，但具體作用機(jī)理仍不明確。因此，本論文在高糖高脂飲食喂養(yǎng)聯(lián)合多次小劑量 STZ注射成功建立版納微型豬糖尿病模型的基礎(chǔ)上，觀察Musclin在版納微型豬血清及各組織中的表達(dá)情況，并初步探討肌肉素(Musclin)在糖尿病中的作用。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：8頭版納微型豬，全雄性，2月齡，隨機(jī)分為兩組：

3、正常對(duì)照組(CD)；高糖高脂+STZ注射組(HFSD+STZ)。
　　2.糖尿病模型的建立：CD組飼以基礎(chǔ)飼料；HFSD+STZ組飼以高糖高脂飼料，在第1個(gè)月的第1周按50mg/kg體重腹腔注射1％的STZ，在飼養(yǎng)第7個(gè)月的第1周連續(xù)3次通過(guò)耳緣靜脈注射STZ(每天1次)，每次注射量為50mg/kg體重。CD組版納微型豬僅注射等體積的檸檬酸一檸檬酸鈉緩沖液。建模期12個(gè)月。
　　3.血清生化指標(biāo)的檢測(cè)：每個(gè)月末采用葡萄糖氧化

4、酶-過(guò)氧化物酶法檢測(cè)空腹血清葡萄糖濃度、直接化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)胰島素濃度、甘油磷酸氧化酶-過(guò)氧化物酶法檢測(cè)甘油三酯和膽固醇氧化酶-過(guò)氧化物酶法檢測(cè)總膽固醇濃度，并在第12個(gè)月末進(jìn)行靜脈葡萄糖耐量試驗(yàn)(IVGTT)和改良靜脈糖耐量試驗(yàn)；每個(gè)月末采用ELISA法檢測(cè)血清中的Musclin含量。
　　4.第12個(gè)月末處死動(dòng)物，分離心肌、肝臟、腎臟、骨骼肌和胰腺組織，HE染色，光鏡下觀察各組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，電鏡下觀察各組織的超微結(jié)構(gòu)，PAS染色

5、觀察肌糖原及肝糖原合成情況,蘇丹Ⅳ染色觀察脂質(zhì)沉積情況。
　　5.Western Blot方法及免疫組織化學(xué)法分別檢測(cè)Musclin在版納微型豬骨骼肌、肝臟、腎臟和胰腺中的蛋白表達(dá)和蛋白定位情況。
　　結(jié)果：高糖高脂飲食喂養(yǎng)聯(lián)合多次小劑量STZ注射導(dǎo)致版納微型豬的糖代謝和脂代謝發(fā)生紊亂：血糖升高，血清胰島素濃度下降，糖耐量減退及胰島素敏感性降低，同時(shí)出現(xiàn)血清甘油三酯、總膽固醇濃度明顯升高。在光鏡、電鏡下，各組織結(jié)構(gòu)發(fā)生了不同

6、程度的病理改變，肌糖原和肝糖原的合成減少，肝臟和胰腺組織內(nèi)出現(xiàn)脂質(zhì)蓄積。高糖高脂飲食喂養(yǎng)加STZ注射后，版納微型豬血清中Musclin的含量增加，到第5個(gè)月增加顯著，6月Musclin表達(dá)達(dá)到高峰，7月開(kāi)始下降，但仍高于CD組。HFSD+STZ組版納微型豬肝、腎、胰腺和骨骼肌組織中Musclin蛋白的表達(dá)明顯升高，與CD組相比差異顯著。
　　結(jié)論：
　　1.高糖高脂飲食聯(lián)合STZ注射可誘導(dǎo)版納微型豬出現(xiàn)高血糖、低胰島素血癥、