STZ誘導糖尿病小鼠模型睪丸組織中NGF、VEGF表達變化.pdf

1、目的：通過觀察鏈脲佐菌素（Streptozocin，STZ）誘導糖尿病小鼠模型睪丸組織中神經(jīng)生長因子（Nerve growth factor，NGF）、血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）表達與分布情況的變化，并探究睪丸組織中NGF與VEGF表達之間的關系，為治療糖尿病致睪丸功能障礙等疾病提供了理論基礎及新的治療方向。
　　方法：選用清潔級4周齡健康雄性C57BL/6小

2、鼠50只，體重18～20g，購自河北醫(yī)科大學動物實驗中心。適應性生長1周，實驗動物隨機分為A組、B組：A組25只C57BL/6小鼠和B組25只C57BL/6小鼠。將C57BL/6小鼠禁食8小時后稱取體重，A組按照200mg/Kg的劑量腹腔注射配制好的STZ溶液(用0.lmol/L無菌、pH4.4檸檬酸緩沖液配制，經(jīng)0.2μm微孔濾膜過濾滅菌)，B組腹腔注射等劑量pH4.4檸檬酸緩沖液。注射STZ一周后尾靜脈取血監(jiān)測C57BL/6小鼠的血

3、糖變化，及時觀察C57BL/6小鼠的體重變化、尿量變化和飲食狀況。C57BL/6小鼠出現(xiàn)多飲、多食、多尿，體重減輕，血糖高于11.1mmol/L即為糖尿病小鼠模型制備成功。A組成模20只，成模率80％。A組中隨機選取18只繼續(xù)進行試驗，分為糖尿病組（DM Group）。B組中隨機選取18只，為對照組（Control Group）。分別在糖尿病小鼠模型制備成功后第8周、第12周、第20周末隨機取兩組小鼠各6只，頸椎脫臼法處死小鼠，解剖取睪

4、丸組織，置入10%福爾馬林（4%甲醛）固定，用于石蠟包埋制備組織切片。分別行HE染色、免疫組化染色，通過免疫組化方法檢測小鼠睪丸組織中NGF、VEGF表達情況。陽性對照由試劑公司提供，應用PBS代替一抗的組織切片做陰性對照，光鏡下陽性部位為棕黃色，細胞核呈淡藍色。免疫組化結(jié)果應用NDP數(shù)字病理掃描儀采集圖像，每張切片睪丸范圍內(nèi)隨機選取曲細精管分布均勻的5個視野(400×)作為觀察區(qū)，并用Image-Pro Plus6.0圖像分析軟件測量

5、積分光度值（Integrated optical density IOD），以各組的均值和標準差進行比較。
　　結(jié)果：
　　1、小鼠的一般狀況
　　糖尿病組小鼠實驗進程中，逐漸表現(xiàn)出被毛蓬松，污穢無澤，易脫落，活動減少，明顯多飲、多食、多尿，體重較對照組減輕明顯，血糖≥11.1mmol/L，明顯高于對照組（P<0.01）。對照組小鼠反應靈敏、精神狀態(tài)良好，動作自如、活躍，毛發(fā)光亮順滑。
　　2、小鼠體重及血糖變化

6、
　　糖尿病組小鼠在造模成功后就出現(xiàn)血糖異常癥狀（血糖≥11.1mmol/L)，為13.74±2.71mmol/L，對照組血糖在正常水平為4.37±0.89mmol/L，兩組具有極其顯著的差異(P<0.01)。
　　3、糖尿病小鼠睪丸組織形態(tài)改變
　　睪丸組織切片HE染色后，光鏡觀察結(jié)果顯示，糖尿病組曲細精管萎縮，各級精母細胞數(shù)量減少，曲細精管基膜變薄、破損、缺失。生精上皮結(jié)構(gòu)排列紊亂，生精細胞脫落，曲細精管管腔內(nèi)精子

7、減少，支持細胞出現(xiàn)變性、空泡化。個別曲細精管僅見緊貼基膜的支持細胞及精原細胞，而其余各級精母細胞及精子減少或消失，表現(xiàn)為生精障礙。睪丸組織中間質(zhì)組織增生，毛細血管管腔閉塞并附血栓。間質(zhì)細胞數(shù)目減少，胞質(zhì)濃縮，細胞核扁圓或橢圓形且核濃染，細胞胞質(zhì)內(nèi)還可見空泡。
　　4、免疫組織化學檢測結(jié)果
　　在兩組小鼠睪丸組織中均可發(fā)現(xiàn)NGF、VEGF表達的陽性顆粒，NGF的免疫復合物位于Sertoli支持細胞的細胞核，次級精母細胞的細胞質(zhì)

8、，精子細胞的類圓形泡狀結(jié)構(gòu)中。在實驗組中，隨著試驗周數(shù)的增加，小鼠睪丸內(nèi)的NGF明顯呈下降趨勢，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；而在對照組中，隨著試驗周數(shù)的增加，NGF無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。在周齡相同的小鼠中，實驗組較對照組睪丸內(nèi)的NGF降低，兩組間比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　小鼠睪丸內(nèi)的VEGF免疫組化復合物只位于Leydig和Sertoli細胞內(nèi)。在實驗組中，隨著試驗周數(shù)的增加，小鼠

9、睪丸內(nèi)的VEGF明顯呈下降趨勢，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。而在對照組中，隨著試驗周數(shù)的增加，VEGF無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。在周齡相同的小鼠中，實驗組較對照組VEGF降低，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　5、VEGF、NGF的相關性
　　小鼠睪丸組織內(nèi)VEGF與NGF水平在相關性分析中，存在強正相關性(r=0.778, P<0.01)。
　　結(jié)論：研究成果表明，在糖尿病小鼠睪丸