二硫化碳對(duì)雄性大鼠睪丸組織氧化損傷和細(xì)胞凋亡的影響及環(huán)孢素A的干預(yù)作用.pdf

1、目的：二硫化碳（carbon disulfide，CS2）是工業(yè)上常用的有機(jī)溶劑和化工原料，廣泛應(yīng)用于粘膠纖維生產(chǎn)、玻璃紙制造業(yè)和有機(jī)溶劑等生產(chǎn)過(guò)程中。近年來(lái)CS2對(duì)男（雄）性生殖系統(tǒng)的影響也被廣泛研究，主要表現(xiàn)為性功能障礙、生殖器萎縮、內(nèi)分泌激素紊亂及精子生成和活力的降低等。但目前關(guān)于CS2對(duì)男（雄）性生殖損傷作用的研究鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)選取雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠進(jìn)行亞慢性吸入染毒，初步探討 CS2對(duì)大鼠一般狀況，

2、睪丸組織病理學(xué)變化，睪丸功能標(biāo)志酶，睪丸組織氧化損傷和睪丸生殖細(xì)胞凋亡線(xiàn)粒體通路的影響及其可能的分子機(jī)制，同時(shí)觀(guān)察環(huán)孢素 A（cyclosporin A，CsA）的干預(yù)作用。為闡明CS2對(duì)男（雄）性生殖損傷的作用提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：清潔級(jí)健康雄性SD大鼠36只并隨機(jī)分為6組：即空白對(duì)照組、3個(gè)CS2濃度組（50,250,1250 mg/m3）、CsA干預(yù)組〔CS2(1250 mg/m3)+CsA(12.5 mg/kg)〕和C

3、sA對(duì)照組（12.5mg/kg）。CS2靜式吸入染毒，每天2小時(shí)，每周5天，共10周，空白對(duì)照組僅吸入新鮮空氣。CsA則依據(jù)大鼠體重并按12.5mg/kg的比例溶解于牛奶中，在CS2染毒4周后進(jìn)行灌胃干預(yù)，每天1次，每周5天，共6周。觀(guān)察大鼠一般狀況，每周末記錄大鼠體重，染毒結(jié)束后稱(chēng)量各組大鼠體重，斷頭處死大鼠，稱(chēng)量睪丸重量；睪丸組織蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin,HE）染色觀(guān)察其形態(tài)學(xué)改變；提取睪丸組織總蛋白，應(yīng)用分

4、光光度法檢測(cè)大鼠睪丸組織中丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量，超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）和過(guò)氧化氫酶（catalase,CAT）活性以及乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase,LDH）和γ-谷氨酰胺轉(zhuǎn)肽酶（gamma-glutamyl transpeptidase,γ-GT）活性，應(yīng)

5、用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）檢測(cè)大鼠睪丸組織中8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷（8-hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG）含量，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（glucose6-phosphatedehydrogenase,G-6-PD）和山梨醇脫氫酶（sorbitol dehydrogenase,SDH）活性；原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)（TdT-mediated

6、dUTP Nick-End Labeling,TUNEL）檢測(cè)大鼠睪丸生殖細(xì)胞凋亡情況；蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）檢測(cè)大鼠睪丸組織中Cyt C、Bcl-xL、Bad、Caspase-9、Caspase-3和PARP蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，10周CS2染毒期間，各組大鼠生長(zhǎng)狀況良好，染毒后期部分大鼠出現(xiàn)毛發(fā)枯槁、活動(dòng)減少、精神萎靡和體型消瘦等癥狀。CS2染毒對(duì)大鼠生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)明顯影響，隨著CS2染毒

7、濃度的增加，HE染色大鼠睪丸組織形態(tài)損傷情況不斷加劇，CsA干預(yù)對(duì)大鼠睪丸組織形態(tài)有一定緩解。G-6-PD、γ-GT和SDH活性均在低濃度組時(shí)顯著性上升，明顯高于空白對(duì)照組（P<0.01，P<0.05）；隨后中、高濃度組G-6-PD、γ-GT和SDH活性開(kāi)始下降，與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CS2染毒組LDH活性與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異（P>0.05）；CsA干預(yù)對(duì)睪丸功能標(biāo)志酶活性無(wú)明顯影響。抗氧化酶SOD、GSH-PX和CA

8、T活性呈下降趨勢(shì)（P<0.01，P<0.05），而脂質(zhì)過(guò)氧化分解產(chǎn)物MDA和DNA損傷標(biāo)志物8-OHdG則有明顯上升（P<0.01），CsA干預(yù)對(duì)大鼠睪丸組織氧化損傷具有一定的保護(hù)作用。中、高濃度組的凋亡指數(shù)明顯高于空白對(duì)照組（P<0.05）；CsA干預(yù)后，CsA干預(yù)組的凋亡指數(shù)有明顯下降（P<0.05），但仍高于空白對(duì)照組（P<0.05）。Western Blot結(jié)果顯示，CS2染毒組CytC、Bad蛋白含量與空白對(duì)照組比較有明顯增加

9、（P<0.05），而Procaspase-9、Procaspase-3、PARP和Bcl-xL蛋白含量則有下降的趨勢(shì)（P<0.05）。CsA干預(yù)后，與高濃度組比較，CsA干預(yù)組Cyt C蛋白含量明顯下降（P<0.05），PARP、Bcl-xL蛋白含量則顯著提高（P<0.05）；Procaspase-9、Procaspase-3和Bad蛋白含量均有不同程度的變化，但與高濃度相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：一定濃度的CS2對(duì)大鼠睪丸