貫葉連翹和小連翹的組織培養(yǎng)及分泌結(jié)構(gòu)與金絲桃素類物質(zhì)含量的相關(guān)性研究.pdf

1、貫葉連翹(HypericumperforatumL.)和小連翹(HypericumerectumThunb.)系藤黃科金絲桃屬多年生草本植物，具有重要的藥用價值。該屬植物所含的金絲桃素、黃酮類等物質(zhì)具有抗抑郁、抗病毒、抗腫瘤和增強(qiáng)免役等作用，從而引起醫(yī)藥界的廣泛重視。本文在組織培養(yǎng)、植物化學(xué)、分泌結(jié)構(gòu)與金絲桃素類物質(zhì)積累的相關(guān)性方面對小連翹和貫葉連翹進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，獲得了一些有價值的成果，填補(bǔ)了貫葉連翹和小連翹在該領(lǐng)域的空白，為貫葉連

2、翹和小連翹的藥用價值的開發(fā)利用提供了重要的科學(xué)依據(jù)。主要研究結(jié)果如下： 1.系統(tǒng)研究了貫葉連翹葉片、結(jié)節(jié)、莖段為外植體誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)方法，獲得了大量的愈傷組織，并分析了其金絲桃素的含量。實驗表明：貫葉連翹莖段較葉容易誘導(dǎo)出愈傷組織；貫葉連翹愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；而MS+2，4-D1.0mg/L+6-BA0.3mg/L適合愈傷組織的繼代培養(yǎng)。HPLC含量測定得出，葉誘導(dǎo)出

3、的愈傷組織中金絲桃素的含量最高，可達(dá)0.0015％，而莖誘導(dǎo)出的愈傷組織中金絲桃素的含量為0.0011％。 2.系統(tǒng)研究了小連翹種子苗的培養(yǎng)方法和植株再生技術(shù)，獲得了大量的愈傷組織和試管苗，建立了小連翹穩(wěn)定的離體培養(yǎng)再生體系。結(jié)果表明：小連翹愈傷組織誘導(dǎo)較難，實驗采用由種子萌發(fā)所獲得的無菌苗的葉片、莖和根進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)；MS培養(yǎng)基中添加1.0mg/L的2，4-D和0.2mg/L的6-BA最適合小連翹愈傷組織的誘導(dǎo)；MS培養(yǎng)基中

4、添加0.2mg/L的NAA和2.0mg/L的6-BA最適合小連翹叢生芽的增殖；1/2MS培養(yǎng)基生根數(shù)最多，且對生根小苗增高效果最好。 3.對貫葉連翹和小連翹的組織培養(yǎng)物進(jìn)行了分泌結(jié)構(gòu)和組織化學(xué)定位研究，結(jié)果表明，金絲桃素存在于分泌細(xì)胞團(tuán)內(nèi)，金絲桃素的積累與分泌細(xì)胞團(tuán)的形成有關(guān)。在未分化的愈傷組織中，未發(fā)現(xiàn)分泌細(xì)胞團(tuán)的存在，與HPLC測定不具有金絲桃素結(jié)果相一致。 4.對小連翹各時期的組織培養(yǎng)物(愈傷組織、叢生芽、生根小苗

5、、生根小苗的葉)進(jìn)行了金絲桃素類物質(zhì)的含量對比研究，結(jié)果表明，愈傷組織、叢生芽、生根小苗、小苗葉片中金絲桃素的含量由低到高，其中＞5cm的小苗葉片中金絲桃素的含量最高，可高達(dá)0.00554％，與野外貫葉連翹植株中金絲桃素含量相接近。表明可以通過小連翹組織培養(yǎng)工業(yè)化生產(chǎn)金絲桃素類物質(zhì)。 5.通過半薄連續(xù)切片和HPLC測定，研究了貫葉連翹和小連翹成熟葉中分泌細(xì)胞團(tuán)結(jié)構(gòu)與金絲桃素的積累的關(guān)系，首次提出了一個分泌細(xì)胞團(tuán)和一個分泌細(xì)胞中金