海洋新型α-淀粉酶AmyP的耐受性研究及其C末端結(jié)構(gòu)域的功能鑒定.pdf

1、α-淀粉酶是廣泛分布在動(dòng)物、植物和微生物中的具有重要應(yīng)用價(jià)值的淀粉酶。前期本實(shí)驗(yàn)室從海洋宏基因文庫中篩選到了一個(gè)與已知的α-淀粉酶的序列相似性低于20％的新型α-淀粉酶AmyP，它代表了一個(gè)新的糖苷水解酶亞家族GH13_37。隨后我們發(fā)現(xiàn)淀粉酶AmyP不僅是一個(gè)生淀粉降解酶，而且具有獨(dú)特的快速偏好性降解大米生淀粉的能力，這種催化能力從未在其它的淀粉酶中發(fā)現(xiàn)過。
　　鑒于AmyP新穎的蛋白序列和進(jìn)化地位以及工業(yè)應(yīng)用時(shí)苛刻的催化環(huán)境，

2、本研究廣泛探索了AmyP對(duì)各種有毒物質(zhì)的耐受性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)α-淀粉酶AmyP可以廣泛的耐受我們測試的各種有毒物質(zhì)，包括金屬離子、高濃度的鹽、表面活性劑、氧化劑、還原劑以及有機(jī)溶劑。此外，Cu2+、Tween20、DTT和正辛醇還能顯著提高AmyP的活性。通過與其它具有耐受性的淀粉酶比較，這是第一次發(fā)現(xiàn)能耐受如此廣泛的種類的有毒物質(zhì)的淀粉酶。該結(jié)果表明，AmyP在苛刻的工業(yè)催化環(huán)境中具有較高的應(yīng)用潛力。
　　由于AmyP有少見的降解生

3、淀粉能力，推測其可能具有負(fù)責(zé)同生淀粉顆粒結(jié)合的淀粉結(jié)合結(jié)構(gòu)域(starch-binding domain，SBD)。通過結(jié)構(gòu)域預(yù)測和與其他已知SBD序列對(duì)比分析，推測AmyP的C末端是一個(gè)SBD。將SBD序列部分通過大腸桿菌系統(tǒng)重組表達(dá)純化得到SBD蛋白。通過親和電泳、測定與生淀粉的吸附能力的實(shí)驗(yàn)方法來研究SBD的性質(zhì)，最終確認(rèn)該部分確實(shí)有結(jié)合生淀粉顆粒的能力。
　　AmyP是在GH13_37家族中報(bào)道的第一個(gè)具有生淀粉降解特性的