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1、目的:研究鹽霉素對(duì)結(jié)直腸癌(CRC)中癌癥干細(xì)胞(CSCs)的影響并初步探討其作用機(jī)制。
方法:(1)體外鹽霉素與奧沙利鉑處理人類(lèi)CRC細(xì)胞系H129和SW480,不同藥物處理后,細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8(CCK8)確定CRC細(xì)胞的存活性,并針對(duì)不同的藥物對(duì)細(xì)胞的作用繪制劑量反應(yīng)曲線;
(2)鹽霉素與奧沙利鉑處理CRC細(xì)胞后,流式細(xì)胞術(shù)定量性分析CD133+細(xì)胞亞群比例,并進(jìn)一步用軟瓊脂檢測(cè)功能性分析CRC細(xì)胞的克隆
2、球形成能力;
(3)鹽霉素與奧沙利鉑處理CRC細(xì)胞后,transwell檢測(cè)分析CRC細(xì)胞的遷移及侵襲能力;
(4)鹽霉素與奧沙利鉑處理CRC細(xì)胞后,采用Westernblot分析,免疫熒光染色,及real-time PCR分析,分別定性、定位、定量性檢測(cè)CRC細(xì)胞中上皮間充質(zhì)性轉(zhuǎn)換(EMT)的上皮性標(biāo)志物E-cadherin和間充質(zhì)性標(biāo)志物Vimentin的表達(dá)情況。
結(jié)果:(1)相對(duì)于奧沙利
3、鉑,鹽霉素對(duì)人類(lèi)CRC細(xì)胞H129和SW480顯示出更強(qiáng)的細(xì)胞毒性作用(IC50處比較,P<0.05);
(2)與奧沙利鉑相反,鹽霉素顯著性的降低了CD133+細(xì)胞亞群的比例(P<0.05);并降低了CRC細(xì)胞的克隆球形成能力(P<0.05);
(3)與奧沙利鉑相反,鹽霉素顯著性的降低了CRC細(xì)胞的遷移和侵襲能力(P<0.05);
(4)與奧沙利鉑不同,鹽霉素顯著性的上調(diào)了MET的上皮性標(biāo)志物E
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