間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞治療卵巢早衰的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　自身免疫性卵巢疾病是卵巢早衰(POF)的重要病因之一，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)及相關(guān)細(xì)胞因子的異?？赡軈⑴c其發(fā)病。在動(dòng)物模型上不同來源間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)均能修復(fù)受損的卵巢功能，但免疫調(diào)控機(jī)制是否參與其中，未曾報(bào)道。本研究首次從免疫調(diào)控的角度研究MSCs對(duì)免疫損傷的卵巢功能的修復(fù)作用，驗(yàn)證MSCs是否通過調(diào)控Treg細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子修復(fù)受損的卵巢功能，為闡明MSCs治療POF的作用機(jī)制、指導(dǎo)其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。<

2、br>　　方法：
　　第一章:檢測(cè)不同卵巢功能女性外周血雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)水平、CD4+Foxp3+Treg細(xì)胞及干擾素-γ(IFN-γ)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)和白介素-10(IL-10)水平。
　　第二章:以透明帶3多肽免疫小鼠構(gòu)建POF模型，通過陰道脫落細(xì)胞涂片、血清性激素、卵巢組織形態(tài)、抗透明帶3抗體(AZP3Ab)及CD45鑒定建模成功，檢測(cè)脾臟CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)

3、胞、卵巢Foxp3及外周血細(xì)胞因子。
　　第三章:在細(xì)胞接觸或Transwell條件下，小鼠BMSCs與抗CD3/CD28激活的POF小鼠脾細(xì)胞增殖模型共培養(yǎng)96h，加入TGF-β1中和抗體、前列腺素E2(PGE2)抑制劑，檢測(cè)CD4+T細(xì)胞增殖、Treg細(xì)胞及上清細(xì)胞因子;分選POF小鼠脾臟CD4+CD25-T細(xì)胞，加入BMSCs共培養(yǎng)96h，檢測(cè)CD4+CD25+T細(xì)胞及上清細(xì)胞因子。
　　第四章:POF小鼠經(jīng)尾靜脈或卵

4、巢移植BMSCs，體內(nèi)示蹤，檢測(cè)卵巢內(nèi)分泌功能(血清性激素、卵巢組織形態(tài)、抗苗勒管激素(AMH)蛋白）;免疫功能（脾臟Treg細(xì)胞、卵巢Foxp3及細(xì)胞因子）;生育能力（移植后4w合籠，孕18.5天觀察胎鼠）。
　　結(jié)果：
　　第一章:與健康育齡女性相比，POF患者血清E2下降、FSH上升，外周血CD4+Foxp3+Treg細(xì)胞減少，TGF-β1和IL-10表達(dá)下調(diào)，IFN-y則上調(diào)。
　　第二章:與對(duì)照組比較，模型組

5、小鼠動(dòng)情周期紊亂比例增加，血清E2下降、FSH上升，各級(jí)卵泡減少，卵巢AZP3Ab和CD45表達(dá)上調(diào)，F(xiàn)oxp3下調(diào)，脾臟CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞減少，外周血TGF-β1和IL-10表達(dá)下調(diào)，IFN-γ上調(diào)。
　　第三章:在細(xì)胞接觸條件下，高劑量BMSCs可抑制POF小鼠的CD4+T細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)Treg細(xì)胞生成，促進(jìn)TGF-β1和IL-10產(chǎn)生以及抑制IFN-γ分泌;在Transwell條件下，BMSCs與脾細(xì)

6、胞增殖模型共培養(yǎng)所產(chǎn)生的免疫抑制效應(yīng)比細(xì)胞接觸條件更明顯，且TGF-β1中和抗體和PGE2抑制劑可以阻斷該效應(yīng)。高劑量BMSCs可以誘導(dǎo)CD4+CD25-T細(xì)胞分化為CD4+CD25+T細(xì)胞。
　　第四章:BMSCs主要遷移至POF小鼠卵巢間質(zhì)，卵泡部位未見其分布;使POF小鼠的血清E2上升，F(xiàn)SH下降;增加各級(jí)卵泡及黃體數(shù)量，上調(diào)卵巢AMH的表達(dá);改善小鼠的妊娠率和平均產(chǎn)鼠數(shù);增加小鼠脾臟Treg細(xì)胞比例以及卵巢Foxp3、TG