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文檔簡介
1、[目的] 1.建立理想的大鼠骨質(zhì)疏松實驗?zāi)P?,為研究中西藥物干預(yù)對骨質(zhì)疏松大鼠骨生物力學(xué)特性、骨密度及羥脯氨酸含量變化的影響提供有效地途徑,同時為利用骨密度儀進(jìn)行骨量測定提供良好的平臺。 2.通過采用骨密度儀對骨骼礦物質(zhì)含量的測定,分析骨質(zhì)疏松骨量丟失的情況,證實造模是否成功。造模成功后,對各組大鼠進(jìn)行3個月藥物干預(yù),然后測定股骨和腰椎的生物力學(xué)特性、骨密度、腰椎羥脯氨酸含量變化。綜合分析上述結(jié)果,探討骨的生物力學(xué)與骨密
2、度及羥脯氨酸含量是否存在相關(guān)關(guān)系,中西藥物治療骨質(zhì)疏松癥的療效及作用機制,為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的治療藥物的選擇提供理論基礎(chǔ)。 [方法] 1.模型制備; 3月齡未交配雌性wistar級別大鼠60只(南方醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供),按體重隨機分為6組:分別為正常對照組(SHAM)、去卵巢手術(shù)組(OVX)、鮭魚降鈣素干預(yù)組(C)、替勃龍片干預(yù)組(T)、替勃龍片和鮭魚降鈣素聯(lián)用干預(yù)組(C T)及仙靈骨葆膠囊干預(yù)組(XL),
3、每組10只。在2%戊巴比妥鈉(50mg.kg-1)腹腔注射麻醉下,采取腰背部正中切口切除大鼠雙側(cè)卵巢,SHAM組只切除與卵巢等量的脂肪組織。術(shù)后3天給予1.6萬U/100g肌注青霉素預(yù)防感染。對各組大鼠的觀測:觀察造模期間大鼠的飲食、飲水、活動、精神狀態(tài)等情況,并記錄體重變化。 2.藥物干預(yù)方案; 術(shù)后自由喂養(yǎng)3個月,對正常對照組和去卵巢組進(jìn)行骨密度測定,確保大鼠造模成功后,按每2周記錄的大鼠體重,經(jīng)人鼠藥量換算后準(zhǔn)確給
4、預(yù)藥物干預(yù)。藥物用量用法如下:密鈣息注射液,大鼠4.51U.kg-1.d-1,肌肉注射;替勃龍片0.09片kg-1.d-1,仙靈骨葆膠囊0.54粒kg-1.d-1,上兩藥研碎稀釋灌胃。 3.指標(biāo)檢測; 造模結(jié)束時空白對照組與模型對照組骨密度的檢測;藥物干預(yù)3個月后,過量麻醉處死大鼠,取L5腰椎及股骨標(biāo)本,測定各組大鼠股骨和腰椎的骨密度,大鼠股骨三點彎曲和L5腰椎壓縮力學(xué)試驗及L5腰椎羥脯氨酸含量的測定。 4.統(tǒng)計
5、方法; 所有數(shù)據(jù)使用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,結(jié)果以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示。大鼠體重變化趨勢采用重復(fù)測量方差分析;造模結(jié)束時兩組均數(shù)之間比較采用t檢驗;藥物干預(yù)3個月后,多組均數(shù)間比較,滿足方差齊性,采用方差分析多重比較LSD法;不滿足方差齊性,采用Welch檢驗多重比較用Tambane's T2法;L5椎體最大載荷與HPY含量進(jìn)行相關(guān)性分析;檢驗水準(zhǔn)為P<0.05。 [結(jié)果] 1.造模情況;
6、 造模期間大鼠正常進(jìn)食、飲水,因為麻醉和手術(shù)創(chuàng)傷,術(shù)后第2天死亡3只,當(dāng)天即按照大鼠體重重新添加3只造模,后無異常情況,大鼠成活,正常對照組(SHAM組)和去卵巢手術(shù)組(OVX組)骨密度測定所得數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理,股骨和腰椎均有顯著性差異(t=13.175,P=0.000;t=12.748,P=0.000),顯示造模成功。 2.藥物干預(yù)3個月后,骨密度和生物力學(xué)測定結(jié)果。 2.1,右側(cè)股骨BMD的組間比較。 與O
7、VX組相比較,除C組無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.653),其余各組均有顯著性差異(P<0.01):與SHAM組相比較,各組均有顯著性差異(P<0.01);T組、C T組及XL組三組之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。說明上述藥物(鮭魚降鈣素除外)干預(yù)對大鼠右側(cè)股骨BMD均能明顯起到抑制骨丟失的效果,但改善的程度明顯沒有達(dá)到正常的水平。 2.2,腰椎BMD的組間比較。 與OVX組相比較,除C組無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.557),其余各
8、組均有顯著性差異(P<0.01);與SHAM組相比較,各組均有顯著性差異(P<0.01);T組和X L組之間無顯著性差異(P>0.05),但是C T組干預(yù)效果明顯優(yōu)于T組和XL組(P<0.05)。說明替勃龍片和鮭魚降鈣素聯(lián)用效果更好。 2.3,右側(cè)股骨最大載荷的組間比較。 與OVX組相比較,各組均有顯著性差異(P<0.01);與SHAM組相比較,各組也均有顯著性差異(P<0.01); XL組、T組及CT組三組之間無顯著性
9、差異(P>0.05),但此三組與C組之間有顯著性意義。說明替勃龍片、替勃龍與鮭魚降鈣素聯(lián)用及仙靈骨葆膠囊對改善骨質(zhì)疏松大鼠腰椎的生物力學(xué)強度的效果較鮭魚降鈣素好,三者所起作用大致相當(dāng)。 2.4, L5腰椎最大載荷的組間比較。 與OVX組相比,各組均有顯著性意義(P<0.01);與SHAM組相比,各組也均有顯著性意義(P<0.01);C組、T組與XL組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),C T組與三者的比較有顯著性意義(P<0.
10、05)。說明鮭魚降鈣素、替勃龍片及仙靈骨葆膠囊對骨質(zhì)疏松大鼠腰椎生物力學(xué)強度有明顯的改善作用,而鮭魚降鈣素與替勃龍片聯(lián)用效果更好。 3.L5腰椎羥脯氨酸含量的測定結(jié)果; 羥脯氨酸含量與腰椎最大載荷不符合正態(tài)分布,應(yīng)用Spearman相關(guān)統(tǒng)計分析,相關(guān)系數(shù)r=0.964,P<0.01。結(jié)果羥脯氨酸含量與腰椎最大載荷呈高度直線相關(guān)性。 [結(jié)論] 1.雙側(cè)卵巢切除術(shù)是原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥比較理想的造模方法。本實驗所
11、建立的模型,成功的模擬了由于絕經(jīng)后雌激素分泌下降對骨質(zhì)造成的不良影響,最終造成骨質(zhì)疏松的主要機理效應(yīng),為研究藥物干預(yù)對骨質(zhì)疏松癥骨骼生物力學(xué)特性的影響提供了較好的動物模型。 2.卵巢切除所導(dǎo)致骨質(zhì)疏松,不僅導(dǎo)致骨密度下降,而且膠原含量減少和質(zhì)量下降。骨膠原含量下降與骨生物力學(xué)強度降低有明顯的相關(guān)關(guān)系,骨質(zhì)疏松性骨折與膠原含量下降有關(guān)。替勃龍片、仙靈骨葆膠囊及降鈣素能增加骨膠原含量,為骨礦化提供框架核心。 3.降鈣素雖然不
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