骨靈片對骨質疏松大鼠腰椎體視學及生物力學的影響.pdf

1、研究背景： 骨質疏松癥(osteoporosis，OP)是以骨量減少、骨微結構退行性改變和骨力學強度減弱，導致骨折發(fā)生的危險性增加為主要特征的一種全身代謝性骨骼疾病。中藥復方通過多靶點的整體調節(jié)，對骨質疏松癥的治療具有優(yōu)勢。骨靈片(GuLingPian，GLP)是依據(jù)祖國醫(yī)學對骨質疏松癥的認識，以“滋腎陰，補腎陽”為大法，針對骨質疏松癥“腎虛為主，多虛多瘀”的病機特點組方，具有補腎壯骨、活血通絡、陰陽雙補功用，應用于臨床多年，對

2、骨質疏松癥患者有良好確切療效。 本實驗將通過觀察GLP對骨質疏松大鼠模型的骨形態(tài)計量學、三維體視學以及生物力學改變，研究其對于骨強度的影響，并進一步探討GLP治療骨質疏松癥的機理，為臨床研究抗骨質疏松藥物提供科學依據(jù)。 目的： 觀察GLP對骨質疏松大鼠模型的骨形態(tài)計量學、三維體視學以及生物力學改變，研究其對于骨強度的影響，并進一步探討GLP治療骨質疏松癥的機理。 方法： 1.骨靈片液根據(jù)骨靈片處方

3、提取工藝提取有效成分，過濾濃縮為終濃度為1g生藥/ml，由南方醫(yī)科大學中醫(yī)藥學院中藥制劑室提供。 2.選用3月齡Sprague-Dawley(SD)系SPF級雌性大鼠36只，體重210-240g，由南方醫(yī)科大學實驗動物研究中心提供(檢測合格證號1802208)。預先對試驗動物進行編號：1，2,3，……34，35，36。通過查看隨機數(shù)字表的方法，單盲隨機分為6組[1]。分別為空白對照組(即假手術組，A組)、去卵巢組(B組)、骨靈片

4、低(C組)、中(D組)、高劑量組(E組)、雌激素對照組(F組)，每組各6只。分別給予生理鹽水、骨靈片高、中、低劑量、雌激素灌飼3個月。 3.采用去除卵巢的方法，建立雌性骨質疏松大鼠模型。 4.術后正常飼養(yǎng)滿1月后開始給藥，給藥前稱量各組大鼠體重，根據(jù)體重換算給藥劑量，各組大鼠均等體積給藥，空白對照組和模型組均予生理鹽水灌服，雌激素對照組給予30μg/Kg·d的17a-炔雌醇灌飼。骨靈片組以臨床等效劑量為準，根據(jù)人鼠劑量換

5、算標準，以高(3.54g.kg-1.d-1)、中(2.66g.kg-1.d-1)、低(1.77g.kg-1.d-1)劑量，各組大鼠每日灌胃1次，共喂服3個月。 5.應用骨組織形態(tài)計量學，對骨質疏松大鼠第三腰椎二維平面的動、靜態(tài)參數(shù)進行測量。 6.各組隨機選取3個標本在二維基礎上利用連續(xù)切片攝像及圖像數(shù)碼處理技術重建腰椎骨小梁的空間結構，結合計算機3D-Doctor軟件測量相關三維參數(shù)。 7.各組取第4腰椎進行生物

6、力學凹入試驗，檢測其松質骨的最大載荷和剛度。 8.統(tǒng)計分析：所有數(shù)據(jù)以x±s表示，用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行方差分析，如果數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，用one-wayANOVA檢驗不同組間有無顯著差異。如果方差齊性，用LSD法比較不同組間差異，如果方差不齊，則用Welch檢驗，多組間用Dunnett'sT3比較分析。相關分析采用多變量偏相關分析法，兩組間比較用配對T檢驗。P<0.05有顯著性差別。 結果： 1.去勢后的

7、模型組較之假手術組，骨小梁分離度、骨形成率、骨礦化沉積率、每毫米破骨細胞數(shù)顯著升高，骨小梁面積百分數(shù)、體積百分數(shù)、厚度、數(shù)量、體元總數(shù)、剛度和最大載荷均顯著下降； 2.骨形態(tài)計量學結果顯示：經過不同劑量的骨靈片治療后，各劑量組和雌激素對照組骨小梁分離度均有顯著下降；中高劑量組和雌激素組骨小梁面積百分數(shù)、厚度和數(shù)量顯著升高。中劑量組的骨小梁厚度比雌激素對照組有顯著增加。 去卵巢組與假手術組比較可見，各動態(tài)參數(shù)均顯著升高。各

8、劑量骨靈片組和雌激素組與去卵巢組比較，BFR/BS、BFR/BV、Oc.N/mm顯著降低，骨靈片中劑量組的BFR/TV和中高劑量組的MAR減少具有顯著差異。骨靈片治療組與雌激素對照組比較，中高劑量組在動態(tài)參數(shù)上差異沒有顯著性。 3.三維重建后的結果顯示，經治療后，雌激素對照組、骨靈片各劑量組的體元總數(shù)以及骨靈片中、高組的骨小梁體積百分數(shù)較之于模型組有顯著增高，且高劑量組的體元總數(shù)增加較雌激素對照組顯著。 4.相關分析顯示

9、三維體元總數(shù)及骨小梁體積百分比與二維骨小梁面積百分數(shù)、骨小梁厚度、骨小梁數(shù)量呈顯著正相關，與骨小梁分離度呈顯著負相關。三維重建前后的骨小梁體積百分數(shù)無顯著差異； 5.生物力學上，經過不同劑量的骨靈片治療后，雌激素組和骨靈片各劑量組剛度以及骨靈片中高劑量組的最大載荷較之于去卵巢組均有顯著升高。與雌激素對照組比較，高劑量組在最大載荷上改善具有顯著差異。 結論： 補腎中藥骨靈片具有降低骨轉換的作用，可以顯著增加骨小梁的